小鼠宮頸原位癌模型的建立及PTD4-GFP對(duì)其透膜效應(yīng)的研究.pdf

1、雞貧血病毒(chicken anemia virus,CAV)是一種類型獨(dú)特的環(huán)狀單鏈(負(fù)鏈)DNA病毒,它可編碼3種蛋白:VP1、VP2及VP3。而VP3(Apoptin,亦稱凋亡素)是功能蛋白,對(duì)正常二倍體細(xì)胞無(wú)殺傷作用,僅誘導(dǎo)具有致瘤表型細(xì)胞或轉(zhuǎn)化表型細(xì)胞的凋亡,因此VP3在腫瘤的生物治療上具有巨大的潛力和廣闊的前景。但VP3為大分子物質(zhì),不能自由穿透細(xì)胞膜,這點(diǎn)限制了其在生物治療上的應(yīng)用。
　　1988年Green和Fra

2、nkel各自獨(dú)立發(fā)現(xiàn)HIV-TAT(human immunodeficiency virustrans-activator of transcription,HIV-TAT)蛋白具有穿透生物膜的能力,TAT蛋白具有生物穿透能力的區(qū)域稱為蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域(protein transduction domain,PTD),大量的研究表明PTD具有強(qiáng)大的運(yùn)載潛能,它能攜帶生物大分子進(jìn)入細(xì)胞內(nèi),并發(fā)揮生物學(xué)活性,而且沒(méi)有細(xì)胞選擇性。
　　

3、于是設(shè)想利用PTD強(qiáng)大的透膜效應(yīng),將VP3導(dǎo)入到腫瘤細(xì)胞中,誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的凋亡,從而達(dá)到治療腫瘤的目的。本實(shí)驗(yàn)室前期已經(jīng)對(duì)VP3在體外腫瘤細(xì)胞中的凋亡做了研究,VP3在體內(nèi)腫瘤中誘導(dǎo)凋亡的性質(zhì)有待進(jìn)一步研究。本課題擬以粘膜上皮類腫瘤宮頸癌為研究對(duì)象,初步探索VP3在體內(nèi)腫瘤中的特性,為以后VP3的生物治療奠定基礎(chǔ)。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)探索建立小鼠原位宮頸癌穩(wěn)定模型的方法及條件,并通過(guò)構(gòu)建PTD4-GFP融合蛋白的原核表達(dá)載體,經(jīng)透膜實(shí)驗(yàn)在激光共聚

4、焦顯微鏡下觀察PTD4介導(dǎo)的融合蛋白在體內(nèi)宮頸癌組織中的透膜效應(yīng),進(jìn)一步驗(yàn)證PTD4具有攜帶生物大分子進(jìn)入腫瘤胞內(nèi)的透膜效應(yīng)。結(jié)果顯示:直接將U14細(xì)胞注射到小鼠宮頸粘膜下,所得到的動(dòng)物模型較穩(wěn)定;PTD4-GFP融合蛋白在3h后即可透過(guò)腫瘤組織進(jìn)入到瘤體中。結(jié)論:直接將細(xì)胞懸液注射到小鼠宮頸粘膜下可得到穩(wěn)定的動(dòng)物模型;PTD4能攜帶GFP蛋白穿透細(xì)胞膜,具有強(qiáng)大的轉(zhuǎn)運(yùn)和透膜功能,為后期進(jìn)一步研究VP3的凋亡機(jī)制及其抗腫瘤治療奠定了基礎(chǔ)