漢坦病毒感染體外培養(yǎng)乳大鼠大腦皮層星形膠質(zhì)細胞的初步研究.pdf

1、漢坦病毒(Hantavirus,HTVs)屬布尼亞病毒科(Bunyaviridae)漢坦病毒屬(Genushantavirus),是引起腎綜合征出血熱(HFRS)和漢坦病毒肺綜合征(HPS)的致病病毒。漢灘病毒(HTNV)、漢城病毒(SEOV)、多布拉戈一貝爾格萊德病毒(DOBV)和普馬拉病毒(PUUV)分別引起重、中、輕程度不同的HFRS。
　　已證實HTVs在許多實驗動物體內(nèi)呈泛嗜性感染，且乳鼠腦對HTVs高度易感，易致致死性

2、腦炎，這也是HTVs致死性的主要原因之一。HTVs侵入機體首先在血管內(nèi)皮細胞增殖，后釋放入血，研究證實病毒可經(jīng)血腦屏障進入腦組織。星形膠質(zhì)細胞終足包繞著毛細血管，是血腦屏障的重要組成成分。但目前對于HTVs感染星形膠質(zhì)細胞尚鮮見報道，為此，我們首先建立了乳大鼠大腦皮層星形膠質(zhì)細胞的體外培養(yǎng)體系，分別用HTNV76-118和SEOVL99毒株感染細胞，為進一步研究HTVs的致病機制提供實驗依據(jù)。
　　我們通過應用出生24h內(nèi)的Spr

3、ague-Dawley乳鼠，建立乳大鼠大腦皮層星形膠質(zhì)細胞的體外培養(yǎng)體系；分別用HTNV76-118株和SEOVL99株病毒感染乳大鼠大腦皮層星形膠質(zhì)細胞，于感染后1d,2d,3d,4d,5d,6d和7d收集細胞，免疫熒光染色、Western印跡和RT-PCR檢測病毒感染細胞病毒NP和S基因片段的變化；用Hoechst33342染色、Annexin-V、Western印跡和RT-PCR檢測病毒感染和星形膠質(zhì)細胞間相互作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：漢坦

4、病毒感染星形膠質(zhì)細胞1d即可在細胞中檢測到病毒抗原和少量病毒S片段RNA擴增產(chǎn)物，在病毒感染5d、6d和7d，病毒NP表達量和病毒S片段RNA擴增產(chǎn)物量較病毒感染后1d顯著增多，隨著感染時間的推移細胞陽性率逐漸增加(P﹤0.01)。且漢坦病毒感染后，未見凋亡細胞，Hsp70輕微增加趨勢，GFAP呈增加趨勢。本實驗成功地建立了乳大鼠大腦皮層星形膠質(zhì)細胞體外培養(yǎng)體系，并證實其可作為HTNV和SEOV感染的靶細胞。隨著感染時間的推移病毒感染細