2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:
  探討羥基紅花黃色素A(HSYA)促進(jìn)激素誘導(dǎo)的股骨頭缺血壞死模兔股骨頭髓內(nèi)及離體兔骨髓基質(zhì)細(xì)胞(BMSCs)成骨分化及其MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的作用機(jī)制。
  方法:
  1.健康成年新西蘭大白兔48只,抽簽法隨機(jī)分為空白組、模型組,模型組采用臀肌注射醋酸潑尼松龍(7.5mg/kg)結(jié)合強(qiáng)迫立位制備激素性股骨頭缺血壞死模型。造模成功后抽簽法將模型組兔隨機(jī)分為模型對(duì)照組、髓芯減壓組、生理鹽水+髓芯減壓組、HSY

2、A+髓芯減壓組,髓芯減壓組僅行髓芯減壓術(shù),生理鹽水+髓芯減壓組采用髓芯減壓術(shù)配合髓腔內(nèi)注射生理鹽水,HSYA+髓芯減壓組采用髓芯減壓術(shù)配合髓腔內(nèi)注射HSYA,空白組和模型對(duì)照組不作治療。1周后兔麻醉,腹主動(dòng)脈采血,采用化學(xué)比色法、氧化酶法檢測各組兔血清中堿性磷酸酶、甘油三脂的含量;取出股骨頭,光學(xué)顯微鏡、透射電子顯微鏡觀察各組兔股骨頭的形態(tài)結(jié)構(gòu);RT-PCR檢測各組兔股骨頭中Cbfα1及Collagen-ⅠmRNA的表達(dá);Western

3、Blotting檢測各組兔股骨頭中p-ERK、p-JNK和p-P38蛋白的表達(dá)。
  2.健康成年新西蘭大白兔36只,無菌條件下于脛骨上端內(nèi)側(cè)骨髓腔穿刺抽取骨髓血,分離、體外培養(yǎng)BMSCs,流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞表面標(biāo)記物結(jié)合成骨、成脂誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)對(duì)其鑒定。取第3代生長良好的BMSCs,抽簽法隨機(jī)分為空白組,模型組及HSYA低、中、高劑量組。模型組用大劑量地塞米松誘導(dǎo)BMSCs成脂分化,HSYA低、中、高劑量組加入地塞米松的同時(shí)分別加入

4、不同濃度的HSYA;空白組無特殊處理。6d后,透射電子顯微鏡觀察各組細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu),檢測細(xì)胞內(nèi)堿性磷酸酶、甘油三脂的含量,RT-PCR檢測細(xì)胞中Cbfα1及Collagen-ⅠmRNA的表達(dá),WesternBlotting檢測細(xì)胞中p-ERK、p-JNK和p-P38蛋白的表達(dá)。
  結(jié)果:
  1.HSYA促進(jìn)激素誘導(dǎo)兔BMSCs成骨分化及其MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制的在體實(shí)驗(yàn):
  (1)血清中成骨標(biāo)志物堿性磷酸酶、成脂標(biāo)

5、志物甘油三脂含量的檢測:干預(yù)1周后,空白組、髓芯減壓組、生理鹽水+髓芯減壓組和HSYA+髓芯減壓組兔血清中堿性磷酸酶含量明顯高于模型對(duì)照組,甘油三脂含量明顯低于模型對(duì)照組(P<0.05)。其中HSYA+髓芯減壓組堿性磷酸酶含量明顯高于髓芯減壓組和生理鹽水+髓芯減壓組(P<0.05),甘油三脂含量明顯低于髓芯減壓組和生理鹽水+髓芯減壓組(P<0.05)。
  (2)光鏡觀察股骨頭組織的病理改變:空白組軟骨下骨小梁致密,排列規(guī)則整齊;

6、骨細(xì)胞清晰,核位于中央,較大;髓腔內(nèi)可見增生活躍的骨髓組織,造血細(xì)胞豐富。模型對(duì)照組軟骨層變薄、結(jié)構(gòu)紊亂,骨小梁較稀疏,部分有斷裂現(xiàn)象,小梁中有骨細(xì)胞壞死;軟骨下區(qū)骨髓內(nèi)脂肪細(xì)胞增多,造血細(xì)胞數(shù)量減少。髓芯減壓組、生理鹽水+髓芯減壓組、HSYA+髓芯減壓組骨細(xì)胞結(jié)構(gòu)較清晰,骨小梁較多,壞死骨細(xì)胞較模型對(duì)照組少,其中尤以HSYA+髓芯減壓組最為明顯。
  (3)透射電鏡觀察股骨頭組織的超微結(jié)構(gòu):空白組軟骨細(xì)胞粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)豐富,無明顯脫

7、顆粒;線粒體較多,嵴結(jié)構(gòu)清晰,未見明顯斷裂;染色質(zhì)分布相對(duì)均勻,細(xì)胞表面突起較多。模型對(duì)照組空泡樣變較空白組明顯增多,異染色質(zhì)部分邊聚,胞內(nèi)可見較大脂滴或次級(jí)溶酶體。HSYA+髓芯減壓組空泡樣變明顯減少,次級(jí)溶酶體明顯減少,大部分線粒體嵴存在。
  (4)股骨頭中成骨標(biāo)志物Cbfα1及Collagen-ⅠmRNA的表達(dá):干預(yù)1周后,空白組、髓芯減壓組、生理鹽水+髓芯減壓組和HSYA+髓芯減壓組明顯高于模型對(duì)照組(P<0.05)。其

8、中HSYA+髓芯減壓組明顯高于髓芯減壓組和生理鹽水+髓芯減壓組(P<0.05)。
  (5)股骨頭中與MAPK信號(hào)通路相關(guān)的p-ERK、p-JNK和p-P38蛋白的表達(dá):干預(yù)1周后,空白組、髓芯減壓組、生理鹽水+髓芯減壓組和HSYA+髓芯減壓組p-ERK1、p-ERK2蛋白表達(dá)明顯高于模型對(duì)照組(P<0.05),p-JNK、p-P38蛋白表達(dá)明顯低于模型對(duì)照組(P<0.05)。其中HSYA+髓芯減壓組p-ERK1、p-ERK2蛋白

9、表達(dá)明顯高于髓芯減壓組和生理鹽水+髓芯減壓組(P<0.05),p-JNK、p-P38蛋白表達(dá)明顯低于髓芯減壓組和生理鹽水+髓芯減壓組(P<0.05)。
  2.HSYA促進(jìn)激素誘導(dǎo)兔BMSCs成骨分化及其MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制的離體實(shí)驗(yàn):
  (1)油紅“O”染色結(jié)果:空白組未發(fā)現(xiàn)紅染的脂肪顆粒;模型組發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的胞漿內(nèi)可見大量染成紅色的脂肪滴,呈誘導(dǎo)后的脂肪細(xì)胞形態(tài);HSYA低、中、高劑量組發(fā)現(xiàn)有脂肪滴分布,三組紅染脂肪滴明顯

10、少于模型組,HSYA高劑量組脂肪滴明顯少于模型組,少于中、低劑量組。
  (2)透射電鏡觀察BMSCs的超微結(jié)構(gòu):各組細(xì)胞干預(yù)6d后,空白組細(xì)胞呈橢圓形或不規(guī)則狀,細(xì)胞質(zhì)少,核大,未見明顯脫顆粒現(xiàn)象。模型組細(xì)胞呈長梭形,未見明顯核仁;細(xì)胞器中線粒體較多呈空泡,可見較多次級(jí)溶酶體或脂滴。HSYA低劑量組表面空泡不太明顯,損傷的線粒體數(shù)量較模型組少,脂滴減少。HSYA中劑量組線粒體較低劑量組增多,空泡樣變化減少,次級(jí)溶酶體減少,未見明

11、顯脂滴。HSYA高劑量組線粒體明顯增多,空泡樣變明顯減少,次級(jí)溶酶體明顯減少,未見明顯脂滴。
  (3)BMSCs中成骨標(biāo)志物堿性磷酸酶、成脂標(biāo)志物甘油三脂含量的檢測:各組細(xì)胞干預(yù)6d后,模型組BMSCs內(nèi)堿性磷酸酶含量較空白組明顯下降(P<0.05),而HSYA各組較模型組均有明顯升高(P<0.05),且隨著劑量的加大,堿性磷酸酶含量呈上升趨勢。模型組BMSCs內(nèi)甘油三脂含量較空白組明顯升高(P<0.05),而HSYA各組較模型

12、組均有明顯降低(P<0.05),且隨著HSYA劑量的加大,甘油三脂含量呈下降趨勢。
  (4)BMSCs中成骨標(biāo)志物Cbfα1及Collagen-ⅠmRNA的表達(dá):各組細(xì)胞干預(yù)6d后,模型組細(xì)胞內(nèi)Cbfα1、Collagen-ⅠmRNA含量均明顯低于空白組(P<0.05),而HSYA各組Cbfα1、Collagen-ⅠmRNA含量均明顯高于模型組(P<0.05),且隨著HSYA劑量的增加,細(xì)胞內(nèi)Cbfα1、Collagen-ⅠmR

13、NA含量呈上升趨勢。
  (5)BMSCs中與MAPK信號(hào)通路相關(guān)的p-ERK、p-JNK和p-P38蛋白的表達(dá):各組細(xì)胞干預(yù)6d后,模型組細(xì)胞內(nèi)p-ERK1、p-ERK2蛋白表達(dá)明顯低于空白組(P<0.05),p-JNK、p-P38蛋白表達(dá)明顯高于空白組(P<0.05),而HSYA各組p-ERK1、p-ERK2蛋白表達(dá)明顯高于模型組(P<0.05),p-JNK、p-P38蛋白表達(dá)明顯低于模型組(P<0.05),且隨著HSYA劑量

14、的增加,細(xì)胞內(nèi)p-ERK1、p-ERK2蛋白表達(dá)呈上升趨勢,p-JNK、p-P38蛋白表達(dá)呈下降趨勢。
  結(jié)論:
  1.羥基紅花黃色素A(HSYA)能促進(jìn)激素性股骨頭缺血壞死模兔股骨頭髓內(nèi)及離體兔BMSCs內(nèi)成骨標(biāo)志物堿性磷酸酶、Cbfα1、Collagen-Ⅰ的表達(dá),抑制成脂標(biāo)志物甘油三脂的表達(dá),抑制激素誘導(dǎo)股骨頭髓內(nèi)及離體兔BMSCs成脂分化,促使其成骨分化。
  2.HSYA通過激活MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路,上調(diào)

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