羥基紅花黃色素A促進(jìn)兔激素性股骨頭缺血性壞死修復(fù)機(jī)制的研究.pdf

1、目的:
　　觀察活血化瘀中藥紅花主要有效成分羥基紅花黃色素A對(duì)激素誘導(dǎo)兔股骨頭缺血性壞死的修復(fù)作用，從MAPK信號(hào)通路探討其作用機(jī)制，為防治激素性股骨頭缺血性壞死提供理論依據(jù)。
　　方法:
　　1.采用賀氏造模法，通過(guò)對(duì)新西蘭兔臀肌注射醋酸潑尼松龍建立兔激素性股骨頭缺血性壞死模型，并通過(guò)透射電鏡觀察、組織形態(tài)學(xué)觀察、空骨陷窩率計(jì)算等方面進(jìn)行鑒定。
　　2.造模成功后，將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為5組，分別采用不同方法進(jìn)行干

2、預(yù)?？瞻捉M:正常飼料喂養(yǎng);對(duì)照組A:髓芯減壓+生理鹽水50μl局部注射;對(duì)照組B:耳緣靜脈注射生理鹽水2ml/d;治療組A:髓芯減壓+羥基紅花黃色素A50μl局部注射;治療組B:耳緣靜脈注射羥基紅花黃色素A2ml/d。
　　3.上述5組動(dòng)物于干預(yù)2周后取出股骨頭，行透射電鏡、組織形態(tài)學(xué)觀察、空骨陷窩率計(jì)算、ALP檢測(cè)、PCR法檢測(cè)Ⅰ型膠原表達(dá)、免疫組化法檢測(cè)MAPK信號(hào)通路JNK的表達(dá)、Westernblot法對(duì)MAPK信號(hào)通路相

3、關(guān)蛋白ERK1、ERK2、P38的表達(dá)進(jìn)行分析檢測(cè)。
　　結(jié)果:
　　1.光鏡觀察:空白組股骨頭軟骨層較厚，成骨活躍，骨小梁排列較規(guī)則，骨細(xì)胞清晰可見(jiàn)，核較大，多位于中央，偶見(jiàn)骨陷窩空虛，髓腔內(nèi)可見(jiàn)增生活躍的骨髓組織。對(duì)照組股骨頭軟骨層較薄，軟骨下骨小梁變細(xì)，結(jié)構(gòu)紊亂，部分有斷裂現(xiàn)象，骨陷窩空虛現(xiàn)象明顯增多，骨細(xì)胞減少，脂肪細(xì)胞增多，且髓腔幾乎完全為脂肪組織代替。治療組股骨頭軟骨層明顯增厚，軟骨下骨小梁變粗，排列較規(guī)則，骨細(xì)

4、胞增生活躍，核大居中，脂肪細(xì)胞減少、變小，骨陷窩空虛現(xiàn)象明顯減少，髓腔內(nèi)可見(jiàn)增生活躍的骨髓組織逐漸取代脂肪組織。
　　2.電鏡超微結(jié)構(gòu)觀察:空白組骨細(xì)胞形態(tài)基本正常，胞內(nèi)細(xì)胞器比較完整，胞漿豐富，未見(jiàn)明顯脂滴;對(duì)照組骨細(xì)胞結(jié)構(gòu)模糊不清，數(shù)量減少，多發(fā)生退變壞死，胞核固縮，骨細(xì)胞內(nèi)有大小不等、多少不一的脂滴出現(xiàn)，胞核被擠向一側(cè);治療組骨組織表面有一層梭形成骨細(xì)胞覆蓋，骨細(xì)胞細(xì)小，核仁可見(jiàn)，漿少，有少量線粒體及粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、溶酶體，個(gè)別

5、骨細(xì)胞結(jié)構(gòu)模糊不清，細(xì)胞內(nèi)脂滴明顯減少或消失。
　　3.空骨陷窩率計(jì)算:空白組空骨陷窩率較低，為14.38％;對(duì)照組空骨陷窩率明顯增高，A高達(dá)26.43％、B高達(dá)25.47％;治療組空骨陷窩率與對(duì)照組相比明顯降低，A為14.63％、B為16.32％。
　　4.ALP檢測(cè):對(duì)照組比空白組ALP含量明顯降低，而羥基紅花黃色素A治療組比對(duì)照組含量明顯升高，且治療組中A與B相比有差異。與對(duì)照組A、B相比，治療組A、B的ALP含量均有

6、明顯升高。
　　5.RT-PCR檢測(cè):對(duì)照組比空白組Ⅰ型膠原表達(dá)均有明顯下調(diào)，而羥基紅花黃色素A治療組比對(duì)照組Ⅰ型膠原表達(dá)均有明顯升高，且治療組中A與B相比無(wú)顯著差異。與對(duì)照組A、B相比，治療組A、B的Ⅰ型膠原表達(dá)均有明顯升高。
　　6.免疫組化:對(duì)照組、治療組JNK表達(dá)比空白組均有上調(diào)，而對(duì)照組上調(diào)更加明顯。治療組與對(duì)照組相比JNK表達(dá)均有顯著降低。
　　7.MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)相關(guān)蛋白表達(dá):通過(guò)Westernblot法

7、對(duì)MAPK信號(hào)通路相關(guān)蛋白ERK1、ERK2、P38的表達(dá)進(jìn)行分析檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)對(duì)照組與空白組相比，P-ERK1、P-ERK2的表達(dá)明顯下調(diào)，而P-P38的表達(dá)則明顯上升。治療組與對(duì)照組相比，P-ERK1、P-ERK2的表達(dá)均明顯上升，而P-P38的表達(dá)則明顯下降。同時(shí)P-ERK1、P-ERK2的表達(dá)在治療組A、B之間差異顯著，而P-P38蛋白表達(dá)差異不明顯。
　　結(jié)論:
　　1.通過(guò)對(duì)股骨頭組織進(jìn)行透射電鏡、組織形態(tài)學(xué)觀察、空

8、骨陷窩率計(jì)算、ALP檢測(cè)、以及Ⅰ型膠原表達(dá)的檢測(cè)，表明羥基紅花黃色素A可促進(jìn)BMSCs的成骨分化，有利于壞死股骨頭骨組織的修復(fù)。
　　2.通過(guò)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)髓芯減壓聯(lián)合局部注射HSYA比單純耳緣靜脈注射HSYA對(duì)壞死股骨頭的修復(fù)作用更強(qiáng)，表明兩者聯(lián)合治療激素性股骨頭缺血性壞死可能與通過(guò)減輕骨內(nèi)壓，改善局部血液循環(huán)同時(shí)通過(guò)活血化瘀，促進(jìn)BMSCs的成骨分化，加快破損骨組織修復(fù)有關(guān)。
　　3.羥基紅花黃色素A對(duì)激素性股骨頭缺血性壞死的