桑黃菌株親緣關(guān)系的研究.pdf

1、桑黃(Phellinus igniarius)又稱桑臣、桑耳、桑黃菇等。分類學(xué)上屬擔(dān)子菌門(Basidiomycom)、層菌綱(Hymenomycetes)、非褶菌目(Aphyllophorales)、銹革孔菌科(Hymenochaetaceae)、針層孔菌屬(phellinus)，是大型珍稀藥用真菌。我國(guó)目前報(bào)道銹革孔菌科有106種，針層孔菌屬有40個(gè)種，其中桑黃是目前國(guó)際公認(rèn)的生物抗癌領(lǐng)域中有效率最高的一種藥用真菌。 本文介

2、紹了桑黃在培養(yǎng)特性、人工栽培、液體發(fā)酵和藥理作用等方面的研究現(xiàn)狀，并對(duì)延邊大學(xué)農(nóng)學(xué)院食用菌實(shí)驗(yàn)室搜集到的桑黃菌株的純培養(yǎng)菌絲體進(jìn)行了拮抗試驗(yàn)、過(guò)氧化物酶同工酶、酯酶同工酶、桑黃基因組DNA提取和RAPD擴(kuò)增條件優(yōu)化及擴(kuò)增產(chǎn)物多態(tài)性方面的研究。拮抗試驗(yàn)結(jié)果表明，S<,3>、S<,6>、S<,7>各菌株間有親緣關(guān)系；過(guò)氧化物酶同工酶結(jié)果表明，S<,3>、S<,6>、S<,7>的酶譜極為相似，說(shuō)明它們之間親緣關(guān)系很近；酯酶同工酶結(jié)果表明所有菌

3、株在Rf=0.805處出現(xiàn)一條穩(wěn)定一致的共有酶帶，而S<,6>和S<,7>具有較近的親緣關(guān)系，其它菌株間的親緣關(guān)系較遠(yuǎn)；桑黃基因組DNA提取及RAPD擴(kuò)增條件優(yōu)化試驗(yàn)表明，采用改良的CTAB法，提取的DNA質(zhì)量較高，適宜于RAPD分析。在25μl反應(yīng)體積中，RAPD反應(yīng)的優(yōu)化體系為：14.67μlddH<,2>O，100 μmol．L<'-1>dNTP，2.5 mmol．L<'-1>Mg<'2+>，10 pmol引物，30 ng DNA

4、模板，1U TaqDNA聚合酶，2.5 μl Buffer。擴(kuò)增反應(yīng)程序?yàn)椋篻4℃預(yù)變性5 min，94℃變性1 min，40℃退火1 min，72℃延伸1.5 min，40個(gè)循環(huán)，最后72℃延伸5 min。用20個(gè)隨機(jī)引物對(duì)不同來(lái)源的桑黃菌株進(jìn)行了RAPD分析，結(jié)果表明：20個(gè)隨機(jī)引物中，有17個(gè)引物的擴(kuò)增產(chǎn)物DNA片段表現(xiàn)出明顯的多態(tài)性，不同引物對(duì)供試菌株擴(kuò)增出現(xiàn)的DNA條帶數(shù)目少則10條，多達(dá)33條，DNA片段從250 bp到2

5、000 bp；17個(gè)引物對(duì)供試桑黃菌株共擴(kuò)增出DNA條帶377條，不同引物擴(kuò)增出的DNA片段譜帶存在較大差異。采用UPGMA系統(tǒng)聚類法，將供試菌株聚類為兩大類，能直觀準(zhǔn)確地揭示菌株間的差異并加以鑒別。 同工酶及RAPD的聚類分析結(jié)果表明可將供試菌株分為兩大類：S<,3>、S<,6>、S<,7>其譜帶數(shù)量和表達(dá)位置較為相似，親緣關(guān)系較近應(yīng)歸為一類；S<,1>、S<,2>、S<,4>、S<,5>歸為一類，表明了它們各自間較近的親緣關(guān)