腎癌細(xì)胞中環(huán)氧合酶-2的表達(dá)及非甾體類抗炎藥NS398對腎癌細(xì)胞生長抑制作用的研究.pdf

1、環(huán)氧合酶(cyclooxygenase，COX)是催化花生四烯酸轉(zhuǎn)化為前列腺素的關(guān)鍵酶，有兩種基因型：結(jié)構(gòu)型COX-1和誘導(dǎo)型COX-2。由于結(jié)構(gòu)的差異以及在細(xì)胞內(nèi)分布的不同，它們在人體內(nèi)有著不同的生理功能。COX-1在大多數(shù)組織中呈相對穩(wěn)定的結(jié)構(gòu)型表達(dá)，具有保護(hù)胃腸道避免損傷和調(diào)節(jié)腎臟血流等作用。COX-2在許多正常組織中不表達(dá)，但在諸如有絲分裂原的刺激、生長因子、細(xì)胞因子、致癌物質(zhì)的誘導(dǎo)下過表達(dá)，導(dǎo)致在炎癥及惡性組織中前列腺素的合成

2、增加。 研究證明，COX-2在許多人類惡性腫瘤組織中表達(dá)顯著上調(diào)，在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起到重要的作用，具有刺激細(xì)胞分化、促進(jìn)血管形成、增強(qiáng)腫瘤的侵襲性、增進(jìn)免疫抑制從而抑制凋亡等作用。許多研究表明，非甾體類抗炎癥藥(Non-SteroidalAnti-inflammatoryDrugs，NSAIDs)能誘導(dǎo)各種腫瘤細(xì)胞凋亡、抑制其生長。NS398是高選擇性COX-2抑制劑，對COX-2有較強(qiáng)的抑制作用。本研究旨在研究COX-2在腎

3、癌細(xì)胞中的表達(dá)情況，通過NS398作用腎癌細(xì)胞來探討NSAIDs對腎癌細(xì)胞增殖作用的影響及其可能的作用機(jī)制。 方法： 采用標(biāo)準(zhǔn)的細(xì)胞培養(yǎng)方法對人腎癌786-0細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，將NS398分別以25μM、50μM、100μM、150μM及200μM的終濃度加入細(xì)胞中作用24及48小時(shí)后，應(yīng)用MTT法檢測NS398對腎癌細(xì)胞增殖的影響；將NS398以上述的各種濃度作用于腎癌786-0細(xì)胞24小時(shí)后，用流式細(xì)胞儀測定細(xì)胞凋亡的情

4、況；將NS398以各種濃度作用腎癌786-0細(xì)胞24小時(shí)后，應(yīng)用EIA法測定細(xì)胞中PGE2含量的變化；各種濃度的NS398作用腎癌細(xì)胞24小時(shí)后，應(yīng)用RT-PCR法檢測細(xì)胞中COX-2及Bcl-2mRNA的水平，WesternBlotting法測定COX-2及Bcl-2蛋白表達(dá)的情況。 結(jié)果： NS398對腎癌786-0細(xì)胞具有較強(qiáng)的抑制作用，且這種抑制作用隨濃度和時(shí)間的增加而增大，呈濃度依賴關(guān)系(P＜0.05)；NS3

5、98作用腎癌786-0細(xì)胞24h后，在細(xì)胞周期G0/G1期前出現(xiàn)明顯的亞二倍體凋亡峰，隨著濃度升高，凋亡峰亦越來越增高(P＜0.05)；NS398可抑制PGE2釋放，并且這種抑制作用呈劑量效應(yīng)(P＜0.05)；RT-PCR和WesternBlot結(jié)果表明，不同濃度NS398作用下的腎癌786-0細(xì)胞中，COX-2無論在mRNA水平還是在蛋白水平，都明顯減弱，且呈劑量梯度下降，同時(shí)Bcl-2mRNA及其蛋白表達(dá)水平也以劑量依賴方式隨之下降

6、。 結(jié)論： 選擇性COX-2抑制劑NS398通過誘導(dǎo)凋亡來抑制腎癌786-0細(xì)胞的增殖；腎癌786-0細(xì)胞中COX-2mRNA及其蛋白表達(dá)上調(diào)，COX-2在腎癌的發(fā)生發(fā)展過程中可能起到重要的促進(jìn)作用；NS398誘導(dǎo)腎癌786-0細(xì)胞的凋亡的作用機(jī)制是多途徑的，NS398可能通過抑制COX-2的表達(dá)，降低腎癌786-0細(xì)胞PGE2的合成，減少前列腺素對腫瘤細(xì)胞增殖的刺激作用來抑制增殖和促進(jìn)凋亡的；NS398也可能通過抑制C