孕鼠維生素A缺乏及DMH誘導(dǎo)對(duì)子代鼠腎發(fā)育及腫瘤發(fā)生的影響.pdf

1、腎母細(xì)胞瘤是小兒最常見的腎腫瘤，其組織來源及發(fā)生學(xué)一直受到眾多學(xué)者的關(guān)注。近年來研究發(fā)現(xiàn)，腎發(fā)育過程中的胚基殘留、分化障礙可能是腎母細(xì)胞瘤發(fā)病的原因之一。而維生素A(Vitamin A，VA)在胚胎發(fā)育中起了重要的關(guān)鍵性的調(diào)控作用，維生素A缺乏可能導(dǎo)致胚胎發(fā)育的畸形和腫瘤的發(fā)生。因此研究維生素A在胚胎發(fā)育中的作用及其與腫瘤形成的關(guān)系是國內(nèi)外的一大熱點(diǎn)。 本研究在前期研究的基礎(chǔ)上，建立維生素A缺乏和DMH誘導(dǎo)的孕鼠模型，旨在通過對(duì)

2、其子代鼠胚胎腎發(fā)育和腫瘤形成的觀察、維甲酸受體(RXR α mRNA)基因以及其他相關(guān)基因(MKRNA和GDNFmRNA)檢測等，揭示腎母細(xì)胞瘤的發(fā)病原因，并從分子生物學(xué)水平上探討其可能的機(jī)理，從而為腎母細(xì)胞瘤的預(yù)防和探索新的治療途徑提供理論依據(jù)。 材料和方法： 取wistar雌鼠25只，12周齡，體重200-220g，按干預(yù)條件隨機(jī)分為以下幾組：(A)維生素A缺乏飲食組6只；(B)正常對(duì)照組3只；(C)DMH+維生素A

3、缺乏飲食組10只；(D)DMH+正常飲食組6只。所有雌鼠喂養(yǎng)2周后與健康wistar公鼠交配成孕鼠。其中C組和D組孕后第二天于其左季肋皮下注射濃度為0.35％的DMH(200mg/kg)，A組和B組孕后第二天于其左季肋皮下注射相當(dāng)體積的EDTA生理鹽水。產(chǎn)后第二天每組分別隨機(jī)抽取15只子代鼠立即處死，檢測其血清維生素A濃度、腎發(fā)育形態(tài)和腎源性剩余(Nephrogenic Rests，NRs)形成。所有母鼠于哺乳期結(jié)束后立即處死。余子代鼠

4、予正常飲食，至出生后365天處死，檢測腎母細(xì)胞瘤和腎源性剩余的形成，RXR α、MK、GDNF等基因mRNA的表達(dá)。 結(jié)果： 各組孕鼠的產(chǎn)仔量分別為：維生素A缺乏飲食組孕鼠6只中，1只孕鼠出現(xiàn)食子現(xiàn)象，實(shí)驗(yàn)子代鼠共51只；正常對(duì)照組孕鼠3只，實(shí)驗(yàn)子代鼠共44只；DMH+維生素A缺乏飲食組孕鼠10只中，3只孕鼠發(fā)生胎盤吸收，實(shí)驗(yàn)子代鼠共47只；DMH+正常飲食組孕鼠6只中，1只孕鼠發(fā)生胎盤吸收，實(shí)驗(yàn)子代鼠共51只。其中兩組

5、維生素A缺乏飲食孕鼠的子代鼠出生后出現(xiàn)了角膜潰瘍、皮膚潰瘍、肢體癱瘓等表現(xiàn)。 經(jīng)出生后立即補(bǔ)充正常飲食癥狀逐漸改善。維生素A缺乏飲食組和DMtt+維生素A缺乏飲食組新生鼠血清維生素A濃度分別0.51±0.13μmol/L和0.49±0.08μmol/L，達(dá)到維生素A缺乏期，且分別低于對(duì)照組和DMH+正常飲食組新生鼠血清維生素A濃度，差異均有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。病理檢查發(fā)現(xiàn)兩組維生素A缺乏飲食組新生鼠腎組織中未成熟的腎

6、小球和腎小管較兩組正常飲食組的新生鼠多見。其中維生素A缺乏飲食組有18例檢出NR(60％，18/30)，正常對(duì)照組有8例檢出NR(26.7％，8/30)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.018)；DMH+維生素A缺乏飲食組有21例檢出NR(70％，21/30)，DMH+正常飲食組有10例檢出NR(33.3％，10/30)，差異亦有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.009)。 出生后365天處死的子代鼠檢測發(fā)現(xiàn)，29只對(duì)照組無腫瘤發(fā)生，36只維生素A

7、缺乏飲食組檢出腎母細(xì)胞瘤5個(gè)(13.9％)，32只DMH+維生素A缺乏飲食組檢出腎母細(xì)胞瘤11個(gè)(34.4％)，36只DMH+正常飲食組檢出腎母細(xì)胞瘤4個(gè)(11.1％)。維生素A缺乏飲食組和正常對(duì)照組子代鼠成瘤率的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.046)，DMH+維生素A缺乏飲食組和DMH+正常飲食組子代鼠成瘤率的差異亦有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.021)。母鼠孕期DMH注射的兩組子代鼠成瘤率為22.1％(15/68)，母鼠孕期EDTA注射的兩組子

8、代鼠成瘤率為7.7％(5/65)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.018)。維生素A缺乏飲食組NR檢出22個(gè)(30.6％，22/72)，正常對(duì)照組NR檢出4個(gè)(6.9％，4/58)，DMH+維生素A缺乏飲食組NR檢出28個(gè)(43.7％，28/64)，DMH+正常飲食組NR檢出14個(gè)(19.4％，14/72)。維生素A缺乏飲食組和正常對(duì)照組子代鼠NR檢出率的差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.001)，DMH+維生素A缺乏飲食組和DMH+正常飲食組子

9、代鼠NR檢出率的差異亦有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.002)。母鼠孕期DMH注射的兩組子代鼠NR檢出率為30.9％(42/136)，母鼠孕期EDTA注射的兩組子代鼠成瘤率為20.0％(26/130)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.029)。維生素A缺乏飲食組腫瘤組織的RXR α mRNA表達(dá)水平(3.17±0.15)較正常對(duì)照組腎組織(3.58±0.20)明顯降低；DMH+維生素A缺乏飲食組腫瘤組織的RXR α mRNA表達(dá)水平(2.91±0.

10、14)較DMH+正常飲食組(3.25±0.18)亦明顯降低，差異均具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。維生素A缺乏飲食組腫瘤組織的MKmRNA表達(dá)水平(2.68±0.05)較正常對(duì)照組腎組織(2.47±0.14)明顯升高；DMH+維生素A缺乏飲食組腫瘤組織的MKmRNA表達(dá)水平(2.86±0.10)較DMH+正常飲食組(2.60±0.07)亦明顯升高，差異均具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。正常對(duì)照組腎組織幾乎未檢測出GDNFmRNA

11、的表達(dá)，明顯低于維生素A缺乏飲食組腫瘤組織的GDNFmRNA表達(dá)水平(2.42±0.06)；DMH+維生素A缺乏飲食組腫瘤組織的GDNFmRNA表達(dá)水平(2.54±0.09)較DMH+正常飲食組(2.39±0.04)亦明顯升高，差異均具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義結(jié)論： 1．大鼠孕期維生素A缺乏會(huì)導(dǎo)致子代鼠腎源性剩余增加，腎母細(xì)胞瘤發(fā)生率增高。在相同的孕鼠DMH誘導(dǎo)的前提下，孕期維生素A缺乏組子代鼠腎發(fā)育差，腎母細(xì)胞瘤發(fā)生率高。 2