乳清蛋白酶解及其產(chǎn)物分析方法研究.pdf

1、由于乳清蛋白的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值、功能特性及其過(guò)敏性，乳清蛋白功能性食品和低過(guò)敏制品日益受到人們的關(guān)注。本文以乳清蛋白中的主要成分α-乳白蛋白和β-乳球蛋白為研究對(duì)象，研究了以下內(nèi)容。 試驗(yàn)建立了同時(shí)測(cè)定乳清蛋白中α-乳白蛋白和β-乳球蛋白含量的高效液相色譜分析方法。采用KromasilC8色譜柱(5μm，250mm×4.6mm)，流動(dòng)相A為0.1％的三氟乙酸-水溶液，流動(dòng)相B為0.09％的三氟乙酸-乙腈溶液梯度洗脫，流速為0.8mL/m

2、in，二極管陣列檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)：215nm，柱溫：30℃。外標(biāo)法定量，α-乳白蛋白和β-乳球蛋白兩種組分線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)分別為0.9998和0.9984，檢測(cè)限為3μg/mL和10μg/mL。加標(biāo)回收率分別為92.3～95.6％，RSD分別為0.5％～3.9％。方法簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確，是α-乳白蛋白和β-乳球蛋白定量測(cè)定的可靠方法之一。 試驗(yàn)建立了定量測(cè)定α-乳白蛋白和β-乳球蛋白的SDS-PAGE電泳方法。研究了α-乳白

3、蛋白和β-乳球蛋白上樣的線性范圍分別為0.25～1.75μg和0.16～1.44μg，在該上樣量范圍內(nèi)其含量與總灰度值呈良好的線形關(guān)系，相關(guān)系數(shù)分別為0.9940和0.9912。 采用Alcalase2.4L、Papain18、Flavourzyme500MG、Protamex、中性蛋白酶、胰蛋白酶和胃蛋白酶七種蛋白酶對(duì)乳清蛋白粉進(jìn)行水解，通過(guò)HPLC方法測(cè)定酶解產(chǎn)物中α-乳白蛋白和β-乳球蛋白的酶解率最終篩選出Alcalase