資木瓜多糖的酶法提取及抗類風濕性關(guān)節(jié)炎作用機制研究.pdf

1、目的:建立測定資木瓜多糖(CSPS)含量的方法,研究纖維素酶法提取CSPS的最佳工藝。建立佐劑性關(guān)節(jié)炎(AA)小鼠模型,研究CSPS對AA小鼠的作用,初步探討其作用機制。
　　方法:苯酚-硫酸法檢測 CSPS含量,考察該方法檢測的精密度、穩(wěn)定性、重現(xiàn)性和回收率;以 CSPS含量為指標,利用單因素實驗和正交實驗,對影響多糖提取的四個因素(加酶量、pH值、酶解時間、酶解溫度)進行優(yōu)化研究。小鼠足跖部注射弗氏完全佐劑(FCA)誘導(dǎo)建立

2、AA動物模型,分組給藥處理后,足趾容積測量儀檢測小鼠足爪腫脹度,電子天平稱重計算脾臟、胸腺的指數(shù),流式細胞計數(shù)法檢測外周血 T淋巴細胞亞群 CD4+、CD8+的表達水平,MTT法檢測脾淋巴細胞增殖反應(yīng),ELISA法檢測脾細胞培養(yǎng)液上清中TNF-α、IL-1β、IL-4的水平,HE染色觀察關(guān)節(jié)組織病理形態(tài)學改變,免疫組化法測定關(guān)節(jié)組織 NF-κB/p65表達水平。
　　結(jié)果:(1)苯酚-硫酸法檢測CSPS含量的精密度、穩(wěn)定性、重現(xiàn)性

3、的RSD分別為1.48％、0.558％、0.78％,回收率為97.04％,RSD為3.52％。纖維素酶法提取 CSPS的最佳工藝條件為:加酶量為1.50％,提取溫度為55℃,提取時間為2.0h,pH為4.0。最優(yōu)條件下 CSPS產(chǎn)率為9.24％。(2)CSPS能有效減輕 AA小鼠的原發(fā)性和繼發(fā)性足腫脹,降低免疫臟器指數(shù),降低 CD4+、提高 CD8+T淋巴細胞水平,抑制AA小鼠的脾淋巴細胞增殖反應(yīng),降低 AA小鼠脾細胞 TNF-α、IL

4、-1β的產(chǎn)生,提高 IL-4含量;CSPS抑制AA小鼠關(guān)節(jié)滑膜細胞增生,減輕炎性細胞浸潤,關(guān)節(jié)組織 NF-κB/p65表達下降。(3)與單獨使用醋酸潑尼松(PAT)相比,CSPS聯(lián)合使用PAT,能夠減輕PAT的毒副作用,顯著降低 TNF-α水平。
　　結(jié)論:(1)苯酚-硫酸法可以用于 CSPS含量測定,纖維素酶能夠有效提高 CSPS的得率。(2)CSPS具有防治類風濕性關(guān)節(jié)炎(RA)作用,機制可能與調(diào)節(jié) T淋巴細胞免疫功能,下調(diào)