苦參細(xì)胞懸浮培養(yǎng).pdf

1、苦參堿類生物堿是從苦參、苦豆子等植物中提取出的一類藥用生物堿，具有抗菌、抗病毒、抗癌、殺蟲等多種功效，目前已經(jīng)被開發(fā)成各類藥物．用來治療癌癥、肝炎、急性炎癥等多種疾病。另外還作為新型生物農(nóng)藥及一些衛(wèi)生保健用品的添加劑。在農(nóng)藥應(yīng)用領(lǐng)域及衛(wèi)生保健用品市場占有一席之地。但我國苦參產(chǎn)業(yè)尚處于生長期，現(xiàn)階段提取苦參生物堿的技術(shù)工藝較多，但較粗放，且對環(huán)境的影響很大，不符合“加強(qiáng)環(huán)境保護(hù)及發(fā)展持續(xù)性農(nóng)業(yè)”的提出；同時隨著人類活動的不斷擴(kuò)展，各種植物

2、資源被破壞，而苦參作為一種很有價值的醫(yī)用、農(nóng)用資源被長期采挖，勢必造成資源的短缺。為實(shí)現(xiàn)該類生物堿的長期可持續(xù)利用和目前對其開發(fā)研究，本論文研究了： (1)為了為苦參組織培養(yǎng)反季節(jié)取材和異地取材，研究苦參植物室內(nèi)種植技術(shù)和組織培養(yǎng)； (2)苦參細(xì)胞懸浮培養(yǎng)影響因子及次生代謝產(chǎn)物檢測； (3)苦參細(xì)胞懸浮培養(yǎng)次生代謝產(chǎn)物殺蟲活性研究。主要結(jié)果如下： 1．試驗(yàn)表明，用剝皮法處理苦參種子出芽，且發(fā)芽率較高，苦參喜歡沙質(zhì)土壤，用水沙+樹

3、根土：1+3或山上黃沙土+樹根土：2+1，有條件少加一點(diǎn)基質(zhì)，苦參幼苗長勢比較好，有利于作為苦參愈傷組織培養(yǎng)試材；苦參在土壤含水量60％左右，溫度在25-27℃下，用日光燈光照8-14h苦參幼苗長勢比較旺盛，有利于苦參組織培養(yǎng)取材。不同外殖體產(chǎn)生愈傷組織的快慢不同，本文選擇3種外殖體，苦參嫩莖、幼葉、嫩芽，結(jié)果表明，嫩莖產(chǎn)生愈傷組織的時間最快，易于誘導(dǎo)愈傷組織的產(chǎn)生，但繼代培養(yǎng)，選用嫩葉誘導(dǎo)的愈傷組織效果最佳。經(jīng)試驗(yàn)確定組織培養(yǎng)最適改良

4、MS培養(yǎng)基成分為：MS+2,4-D0.8mg.L<'-1>+6-BA2mg．L<'-1>，pH5.8，蔗糖含量為3％；最適溫度是：24℃-26℃。 2．苦參細(xì)胞組織懸浮培養(yǎng)是解決苦參資源短缺問題的一個很好的方法，試驗(yàn)結(jié)果表明嫩葉產(chǎn)生愈傷組織作為細(xì)胞組織懸浮培養(yǎng)最好，易于懸浮培養(yǎng)細(xì)胞生長。最適改良MS培養(yǎng)基成分為：MS+2,4-D1.2mg.L<'-1>+6-BA2.0mg.L<'-1>，pH6.0，蔗糖含量為3％；最適溫度是：2

5、4℃-26℃，黑暗條件有利于細(xì)胞組織生長，但不產(chǎn)生次生代謝產(chǎn)物或產(chǎn)生極微量的氧化苦參堿；光照條件下有利于次生代謝產(chǎn)物產(chǎn)生，經(jīng)氣譜檢測發(fā)現(xiàn)含有苦參堿，沒有檢測到氧化苦參堿和槐果堿。 3．試驗(yàn)結(jié)果表明，苦參懸浮培養(yǎng)粗提物對供試的四種害蟲均表現(xiàn)出一定的觸殺活性和拒食活性。對菜蚜的觸殺活性最高，其在毒力回歸方程、相關(guān)系數(shù)、LD<,50>值分別為Y=-0.213+2.81×、0.9925、71.48：而對粘蟲觸殺活性較低。對菜青蟲的拒食活