TGF-βⅡ型受體亞型在博來霉素誘導大鼠肺成纖維化中的表達.pdf

1、目的：肺纖維化是呼吸系統(tǒng)中嚴重危害人類健康的一組疾病。它是以慢性創(chuàng)傷形成和細胞外基質(zhì)（extracelluar matrix，ECM）沉積為特點的疾病，進而導致肺功能的破壞和出現(xiàn)呼吸衰竭。也就是說，它是以過多的ECM產(chǎn)生和沉積為特征的疾病，這個過程通常需要很多年，并且能夠?qū)е路喂δ軗p害和喪失。目前發(fā)病機制尚不明確，臨床上缺乏有效的治療方案。盡管已形成的纖維化不可逆轉(zhuǎn)，但肺纖維化是一個進行性慢性病理過程，探索肺纖維化發(fā)病的分子機制以尋找新

2、的干預靶點，對延緩或阻斷肺纖維化進展具有重要意義。 在纖維化的發(fā)展過程中，轉(zhuǎn)化生長因子-β（transforming growth factor-β，TGF-β）促纖維化的作用是肯定的。TGF-β誘導成纖維細胞合成和積聚ECM，長期以來，它被看作是一個重要的纖維化應答調(diào)節(jié)子。TGF-β通過調(diào)控ECM生成細胞的轉(zhuǎn)錄或轉(zhuǎn)錄后水平，促進各種ECM表達，并能誘導成纖維細胞等多種細胞合成和分泌細胞外基質(zhì)蛋白并抑制其降解。然而，通過TGF-

3、β介導的纖維化應答信號轉(zhuǎn)導通路，是由TGF-β與其受體結(jié)合后來實現(xiàn)信號通路的激活，進而誘導一系列的信號轉(zhuǎn)導過程，實現(xiàn)它的生物學效應。而TGF-β依賴轉(zhuǎn)化生長因子-βⅡ型受體（transforming growth factor-βⅡ type receptor，TGF-βRⅡ）發(fā)揮作用，只有二者在細胞表面結(jié)合后才能誘發(fā)信號轉(zhuǎn)導通路。研究表明，TGF-βRⅡ包括TβR-Ⅱ、ActR-Ⅱ、ActR-Ⅱ B、BMPR-Ⅱ和AMHR-Ⅱ五種亞型

4、，但究竟亞型中的哪些因子參與了肺纖維化的形成過程，目前尚未明確。本研究以博來霉素（bleomycin，BLM）誘導的肺纖維化大鼠為模型，觀察肺纖維化過程中TGF-βRⅡ各亞型表達的變化，為今后臨床肺纖維化的治療提供干預靶點。 方法：1．實驗動物：6周齡SD大鼠，雌性，體重180g-220g。2．動物模型制備：大鼠經(jīng)乙醚麻醉后，頸前暴露氣管，一次性氣管內(nèi)注入0．4%BLM生理鹽水注射液（5mg/kg）。3．分組：共分兩組，每組各3

5、6只大鼠。（1）肺纖維化組（用F代表）分為6個亞組：F1、F3、F7、F14、F28、F35組，分別代表給予BLM后第1、3、7、14、28、35天后處死；（2）正常對照組（用N代表）：取同期大鼠處死。4．研究方法：應用蘇木素-伊紅（HE）染色法觀察肺組織病理形態(tài)學變化，應用實時熒光定量PCR（real-time PCR）分析肺組織中TGF-βRⅡ各亞型的表達。 結(jié)果：1．光鏡病理形態(tài)學觀察（HE染色）：肺纖維化造模成功，給予B

6、LM后第1、3、7、14、28、35天纖維化程度逐漸明顯。2．實時熒光定量PCR分析各組不同階段肺組織中TGF-βRⅡ各亞型的表達變化：ActR-Ⅱ A和ActR-Ⅱ B在纖維化形成過程中表達較低，表達水平最高的階段不到正常對照組的一倍，而TβR-Ⅱ在給予BLM后第一天即處于高表達水平，隨后在第7天達到第一個高峰，繼而逐漸下降至第28天表達水平為最低狀態(tài)接近基線，隨后又升高，到第35天仍處于高水平。AMHR-Ⅱ在給予BLM后第1天即開始

7、升高，至第14天達到高峰，后逐漸下降，在第28天和第35天時降之基線附近。纖維化組TβR-Ⅱ、ActR-Ⅱ A、ActR-Ⅱ B和AMHR-Ⅱ同正常對照組比較，P<0．05，具有統(tǒng)計學意義。纖維化各組因子比較，僅TβR-Ⅱ因子與其他各因子相比，P<0．05，具有統(tǒng)計學意義，而其它各因子間的相互比較，P>0．05，沒有統(tǒng)計學意義。 結(jié)論：1．TβR-Ⅱ、ActR-ⅡA、ActR-Ⅱ B和AMHR-Ⅱ均參與肺纖維的形成過程。2．Tβ