Tet-On-Off系統(tǒng)對AAV介導的TH和GDNF表達調(diào)控的研究.pdf

1、研究證實TH和GDNF可以通過AAV載體系統(tǒng)在體內(nèi)及體外有效表達.該課題旨在通過在AAV載體中插入改良的Tet-On/Off基因調(diào)控體系,即插入通過突變獲得的新一代反式激活子rtTA2s-S2、rtTA2s-M2和tTA2s,人為的調(diào)節(jié)受控基因的轉(zhuǎn)錄與翻譯,使得基因的表達可以限制在安全的范圍之內(nèi),從而避免TH、GDNF等治療基因過度或長期表達可能帶來的毒副作用.結(jié)論:1、新型突變反式激活子rtTA2s-S2、rtTA2s-M2和tTA2

2、s能夠有效調(diào)節(jié)下游被調(diào)控基因的表達,在未被激活的條件下,可將受控基因表達控制在較低范圍內(nèi).2、Tet-On調(diào)控系統(tǒng)中,與rtTA2s-S2相比,rtTA2s-M2擁有更高的激活潛能,但同時受控基因的基礎(chǔ)表達量亦高于rtTA2s-S2.rtTA2s-S2擁有較低的受控基因基礎(chǔ)表達量,與之相對應(yīng),對于激活狀態(tài)和非激活狀態(tài),rtTA2s-S2擁有更高的相對激活化.3、Tet-Off系統(tǒng)中,在被強力霉素抑制的狀態(tài)下,tTA2s調(diào)控的基因具有最低

3、的基礎(chǔ)表達量,但同時激活潛能亦低.4、應(yīng)用新型突變反式激活子rtTA2s-S2、rtTA2s-M2和tTA2s可以有效調(diào)節(jié)基于Tet-On/Off調(diào)控系統(tǒng)并由AAV介導的TH、GDNF和d2EGFP基因的表達.5、基于rtTA2s-S2的重組AAV(AAV-rtTA2s-S2-TRE-GDNFflag)可有效感染小鼠的腓腸肌,高效價AAV感染并不導致明顯的病原性.6、強力霉素可以有效的調(diào)控構(gòu)建于反式激活子rtTA2s-S2基礎(chǔ)上的,由A