上皮性卵巢癌多藥耐藥基因啟動子轉(zhuǎn)錄活性的研究.pdf

1、目的:(1)探討卵巢癌紫杉醇敏感細(xì)胞株A2780和紫杉醇耐藥細(xì)胞株A2780/Taxol P-gp的表達(dá)及其水平差異.(2)構(gòu)建含MDR1啟動子的重組熒光素酶報告基因載體,檢測MDR1啟動子的活性及TSA對其活性的影響,為下一步對多藥耐藥性卵巢癌細(xì)胞進(jìn)行靶向基因治療提供實驗基礎(chǔ).方法:(1)提取培養(yǎng)細(xì)胞的胞膜蛋白,采用Western blot檢測膜糖蛋白P-gp的表達(dá).(2)將帶有MDR1基因啟動子的重組熒光素酶報告基因系統(tǒng)分別轉(zhuǎn)染紫杉

2、醇耐藥A2780/Taxol和紫杉醇敏感A2780細(xì)胞株,然后比較測定的轉(zhuǎn)染細(xì)胞裂解液的熒光素酶活性;同時將轉(zhuǎn)染后的A2780和A2780/Taxol細(xì)胞用TSA處理,測定TSA對啟動子活性的影響.結(jié)果:(1)紫杉醇耐藥細(xì)胞株A2780/Taxol膜糖蛋白P-gp的表達(dá)較紫杉醇敏感細(xì)胞株A2780明顯增強.(2)A2780/Taxol細(xì)胞轉(zhuǎn)染重組質(zhì)粒pMDR1280后測定的熒光素酶活性是轉(zhuǎn)染帶有SV40啟動子的pGL3-control質(zhì)

3、粒的近5倍(P<0.05),而A2780轉(zhuǎn)染pMDR1280后其活性幾乎無變化;共轉(zhuǎn)染pMDR1280和pCMV-β的A2780/Taxol細(xì)胞經(jīng)TSA作用后MDR1啟動子的功能活性增加了近7倍(P<0.05).結(jié)論:(1)紫杉醇耐藥細(xì)胞株A2780/Taxol中的MDR1基因表達(dá)水平遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于紫杉醇敏感細(xì)胞株A2780.(2)MDR1啟動子在紫杉醇耐藥A2780/Taxol細(xì)胞株中表現(xiàn)出比在紫杉醇敏感A2780細(xì)胞株中強的轉(zhuǎn)錄活性,這種