PRRSV的E基因和豬IL-10、IL-17基因的克隆及其重組真核載體的構(gòu)建與表達.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、豬繁殖與呼吸綜合征是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)引起的以母豬繁殖障礙與仔豬呼吸道為主要特征的傳染?。籔RRSV的E基因能產(chǎn)生中和抗體；IL-10是一種多功能的宿主細胞因子，有增強免疫的作用；而IL-17是一種新發(fā)現(xiàn)的多效細胞因子。 本研究為尋找一種高效基因工程疫苗表達PRRSV的E蛋白抗原，通過設(shè)計4對針對PRRSV的E和RE基因、豬的IL-10和IL-17基因，在每對引物的上下游都加上適當(dāng)?shù)拿盖形稽c，在E和RE引物的

2、下游分別加上血凝素(HA)報告基因，在IL-10和IL-17引物的下游分別加上組蛋白(His)報告基因，通過擴增出含完整開放閱讀框架(ORF)的四個目的基因片段，構(gòu)建出三個真核表達載體：P-E、P-RE-IL-10、P-RE-IL-17。 對構(gòu)建成功的3個真核表達載體用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法進行了體外細胞表達，通過G418篩選獲得了能夠穩(wěn)定表達3個質(zhì)粒的細胞株，在連續(xù)傳幾次代后，用間接免疫熒光檢測出了表達的E蛋白，E和IL-10、IL-1

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