ECV304細(xì)胞用于體外血管新生的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、第一部分:ECV304細(xì)胞體外二維培養(yǎng)形成管狀結(jié)構(gòu)的觀察.目的:觀察ECV304細(xì)胞體外二維培養(yǎng)能否形成管狀結(jié)構(gòu).方法:我們把自然轉(zhuǎn)化的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞—ECV304細(xì)胞株引入實(shí)驗(yàn),不用額外的生長(zhǎng)因子,不涂布基質(zhì),選擇低血清濃度、低細(xì)胞種植密度或常規(guī)長(zhǎng)期培養(yǎng)等條件進(jìn)行二維培養(yǎng).結(jié)果:在多種條件下,二維培養(yǎng)的ECV304細(xì)胞都能形成管狀結(jié)構(gòu),結(jié)論:提示ECV304細(xì)胞可能是研究體外血管新生良好的內(nèi)皮工具.第二部分:體外血管新生三維模型的構(gòu)

2、建.目的:以ECV304細(xì)胞為內(nèi)皮工具,構(gòu)建體外血管新生的三維模型.方法:以自制的鼠尾膠原制成的凝膠作為細(xì)胞外基質(zhì),在凝膠上面種植ECV304細(xì)胞,長(zhǎng)滿單層后用含堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(b-FGF)的培養(yǎng)液刺激,用倒置相差顯微鏡觀察ECV304細(xì)胞入侵凝膠的情況.結(jié)論:自制的鼠尾膠原凝膠可以為內(nèi)皮細(xì)胞提供良好的細(xì)胞外基質(zhì)微環(huán)境,再加上必要的生理、病理信號(hào)刺激,將能夠誘導(dǎo)ECV304細(xì)胞表現(xiàn)出血管新生中的遷移、增殖、發(fā)芽等步驟.ECV30

3、4細(xì)胞三維凝膠模型可用來(lái)研究血管新生.第三部分:心肌成纖維細(xì)胞誘導(dǎo)體外血管新生作用初探.目的:探討心肌成纖維細(xì)胞在血管新生中的作用.方法:分離培養(yǎng)乳鼠心肌成纖維細(xì)胞(CF)并收集其條件培養(yǎng)液(CF-CM),用其作為ECV304細(xì)胞的培養(yǎng)液,<'3>H-TdR摻入法檢測(cè)CF-CM對(duì)ECV304細(xì)胞增殖活性的影響,并采用體外三維模型檢測(cè)其是否能誘導(dǎo)ECV304向膠內(nèi)入侵、發(fā)芽.結(jié)論:心肌成纖維細(xì)胞條件培養(yǎng)液有促進(jìn)ECV304細(xì)胞增殖和遷移的