胃腸道間質(zhì)瘤伊馬替尼繼發(fā)耐藥的機(jī)制研究.pdf

1、本文分兩部分進(jìn)行了闡述：
　　第一部分:p55PIK與 GIST伊馬替尼耐藥的相關(guān)性及功能研究
　　目的：探討 p55PIK與 GIST伊馬替尼耐藥的關(guān)系,觀察 p55PIK在 GIST伊馬替尼耐藥中的作用。
　　方法：(1)選取因腹腔巨大 GIST行手術(shù)切除,術(shù)后口服伊馬替尼治療,其間控制良好,后因繼發(fā)耐藥復(fù)發(fā)行第二次手術(shù)治療的患者作為研究對象。通過免疫組織化學(xué)染色法檢測 p55PIK在伊馬替尼耐藥前后的GIST組織

2、中的表達(dá)差異;(2)將 GIST882細(xì)胞的培養(yǎng)基中持續(xù)加入伊馬替尼培養(yǎng),并逐漸增加藥物劑量,誘導(dǎo) GIST882伊馬替尼耐藥細(xì)胞系的形成,通過 Western Blot、實(shí)時熒光定量 PCR( Quantitative Realtime-PCR)等方法比較耐藥前后細(xì)胞中p55PIK的表達(dá);(3)將 GIST882細(xì)胞注射到裸鼠皮下成瘤(F0)后,持續(xù)伊馬替尼灌胃治療,三周后將腫瘤取出,種植于下一批裸鼠皮下,并繼續(xù)伊馬替尼灌胃治療,成功

3、構(gòu)建了GIST伊馬替尼繼發(fā)耐藥的動物模型(F6)。通過 Western Blot、實(shí)時熒光定量 PCR(Quantitative Realtime-PCR)等方法檢測各代移植瘤中的p55PIK的表達(dá)水平;(4)在 GIST敏感細(xì)胞中高表達(dá) p55PIK,通過 CCK8法觀察 GIST882細(xì)胞對伊馬替尼敏感性變化;在 GIST耐藥細(xì)胞中低表達(dá)p55PIK,通過 CCK8法觀察 GIST耐藥細(xì)胞對伊馬替尼的敏感性。
　　結(jié)果：(1)

4、p55PIK在耐藥后的組織﹑細(xì)胞及裸鼠移植瘤中的表達(dá)明顯高于耐藥前;(2)高表達(dá) p55PIK能夠降低伊馬替尼對 GIST882細(xì)胞增殖的抑制作用,干擾 p55PIK可以增加伊馬替尼對 GIST882-IR細(xì)胞增殖的抑制作用。
　　結(jié)論：p55PIK在伊馬替尼繼發(fā)耐藥的GIST中高表達(dá),高表達(dá) p55PIK能促進(jìn) GIST882細(xì)胞耐藥,而低表達(dá) p55PIK能夠增加 GIST882-IR對伊馬替尼的敏感性。
　　第二部分:

5、p55PIK在GIST伊馬替尼耐藥中的作用機(jī)制探討
　　目的：探討 p55PIK影響 GIST伊馬替尼耐藥的具體分子機(jī)制。
　　方法：(1),通過免疫組織化學(xué)方法檢測耐藥前后腫瘤組織中KIT的表達(dá),觀察 KIT的表達(dá)是否和p55PIK具有一致性;(2),通過 Western Blot方法在伊馬替尼敏感的GIST細(xì)胞(GIST882)和伊馬替尼耐藥的GIST細(xì)胞(GIST882-IR)中檢測 p55PIK﹑KIT的表達(dá)及NFκ

6、B的激活情況情況,證實(shí)三者間變化具有一致性;(3),在 GIST882細(xì)胞中高表達(dá) p55PIK,通過 Western Blot方法檢測 NFκB的激活及KIT的表達(dá)情況,在 GIST882-IR細(xì)胞中低表達(dá) p55PIK,通過 Western Blot方法檢測 NFκB的激活及KIT的表達(dá)情況;(4),在 GIST882細(xì)胞中加入 NFκB的抑制劑,再高表達(dá) p55PIK,通過Western Blot方法檢測 KIT的表達(dá)。
　

7、　結(jié)果：(1),耐藥后腫瘤組織中KIT的表達(dá)較耐藥前明顯增加,與 p55PIK的表達(dá)變化具有一致性;(2),GIST882細(xì)胞被誘導(dǎo)耐藥后,耐藥細(xì)胞中p55PIK的表達(dá)增加﹑NFκB通路激活﹑KIT的表達(dá)增加,具一致性;(3),高表達(dá) p55PIK可以促進(jìn) NFκB的激活及KIT的表達(dá),低表達(dá) p55PIK可以抑制NFκB通路的激活及KIT的表達(dá);(4), p55PIK促進(jìn) KIT基因轉(zhuǎn)錄是 NFκB依賴的。
　　結(jié)論：p55PI