不同品種紫花苜蓿根瘤菌遺傳多樣性研究.pdf

1、本論文是在關(guān)中部分地區(qū)不同品種紫花苜蓿根瘤菌表型分類的基礎(chǔ)上，運用BOX-PCR、SSCP-PCR、IGS-RFLP三種方法對不同品種紫花苜蓿根瘤菌進行了遺傳多樣性分析，并測定了其中4株代表性菌株的IGS全序列，分析其系統(tǒng)發(fā)育地位，旨在研究不同品種紫花苜蓿根瘤菌的遺傳多樣性。 BOX-PCR擴增全基因組的反向重復(fù)序列，其指紋圖譜能較好反映菌株的特異性。結(jié)果顯示，63株供試菌株和2株參比菌株的遺傳帶譜較為豐富，表現(xiàn)出較大的差異。由

2、聚類結(jié)果可知，所有供試菌株在74％相似性水平上分成6個遺傳群。群Ⅰ和群Ⅱ各由13株供試菌株組成，群Ⅲ由8株供試菌株組成，群Ⅳ由18株供試菌株組成，群Ⅴ由3株供試菌株組成，群Ⅵ由4株供試菌株組成。除NWMSH072和NWMSH073相似性達到100％，其他各菌株之間均表現(xiàn)出一定的遺傳差異性。 SSCP技術(shù)是廣泛用于揭示基因差異的遺傳學(xué)手段，具有高度的靈敏性，能有效地揭示菌株的遺傳多樣性。本試驗分別擴增了16S rDNA上變異相對較

3、大的V2-V3區(qū)和V4-V5區(qū)，然后進行SSCP分析。結(jié)果表明，42株供試菌株和2株參比菌株的V2-V3區(qū)段有12種不同的基因型；V4-V5區(qū)段有13種基因型。各條帶之間都顯現(xiàn)出一定的差異性，有部分菌株的單鏈具有多種構(gòu)象。有些來自同一品種紫花苜蓿的菌株表現(xiàn)出不同的基因型，而有些來自不同品種的菌株卻表現(xiàn)出相同的基因型。 16S-23S rDNA間隔序列IGS的變異度大，其指紋圖譜具有種、亞種、生物型甚至菌株水平特異性。IGS AR

4、DRA分析表明，65株供試菌株和2株參比菌株在64％的相似水平上聚在一起。聚類結(jié)果表明，所有供試菌株在89％相似性水平上分成2個遺傳群。群Ⅰ最大，由51株供試菌株組成，群Ⅱ由11株供試菌株和1株參比菌株USDA1002組成。在群Ⅰ有47株供試菌株的相似性達到100％；群Ⅱ有2個100％相似的分支。 根據(jù)IGS-RFLP的分析結(jié)果，選取其中代表性4株菌進行IGS全序列測定，分析其系統(tǒng)發(fā)育地位。系統(tǒng)發(fā)育分析得到，所有參比菌株分成中華

5、根瘤菌屬(Sinorhizobium)、根瘤菌屬(Rhizobium)、中慢生根瘤菌屬(Mesorhizobium)、慢生根瘤菌屬(Bradyrhizobium)和土壤桿菌屬(Agrobacterium)五個分支。IGS全序列分析顯示NWMSH063和NWMSH001與中華根瘤菌S.medicae親緣關(guān)系較近，與S.medicae USDA1037相似性最高，分別為89.7％和83.2％；NWMSH050和NWMSH035與所有參比菌株