氟話導(dǎo)大鼠肝組織損傷及機(jī)制的研究.pdf

1、目的：肝臟是機(jī)體新陳代謝及解毒功能得以完成的重要器官，過(guò)量氟進(jìn)入體內(nèi)必然對(duì)肝臟產(chǎn)生毒性作用。本課題建立氟中毒大鼠模型，從形態(tài)學(xué)、分子生物學(xué)方面研究氟對(duì)大鼠肝臟組織損傷和細(xì)胞凋亡的影響及可能作用機(jī)制，為氟中毒防治和毒性評(píng)價(jià)提供科學(xué)依據(jù)和思路。
　　方法：清潔級(jí)SD雄性大鼠48只，體重（90士10）g，隨機(jī)分為對(duì)照組、低氟組、中氟組和高氟組，每組12只，分別飲用含0，50，100，200mg/L氟化鈉的去離子水，建立氟中毒大鼠動(dòng)物模型

2、。分別染氟90d和120d，用氟離子選擇電極法測(cè)尿中氟的含量，觀察動(dòng)物臨床表現(xiàn)及肝組織病理變化，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)肝細(xì)胞凋亡情況，單細(xì)胞凝膠電泳檢測(cè)肝細(xì)胞DNA損傷程度，免疫組化法檢測(cè)肝組織中Caspase-3、Caspase-9蛋白表達(dá)水平，熒光定量PCR檢測(cè)肝組織中Caspase-3、Caspase-9mRNA表達(dá)水平。
　　結(jié)果：
　　1．染氟90d、120d，低、中、高劑量染氟組大鼠尿氟均顯著高于對(duì)照組(p<0.05或p

3、<0.01)；實(shí)驗(yàn)組大鼠均出現(xiàn)不同程度的氟斑牙癥狀；表明已成功復(fù)制出慢性氟中毒大鼠模型。
　　2．不同染氟周期(90d、120d)的大鼠肝組織細(xì)胞呈現(xiàn)不同程度腫脹，以中央靜脈為中心的肝細(xì)胞脂肪變性為重，肝組織內(nèi)出現(xiàn)多種灶狀病變。肝臟中央靜脈受損，胞漿內(nèi)有較大的紅染顆粒或胞漿疏松，少數(shù)散在的肝細(xì)胞漿及胞核濃縮和單個(gè)細(xì)胞壞死，尤以120d的為重。
　　3．染氟90d、120d不同劑量染氟組細(xì)胞凋亡率與對(duì)照組相比，均顯著增高(p<

4、0.01)，且高劑量組肝細(xì)胞凋亡率顯著高于低、中劑量組(p<0.01)；染氟周期為120d與染氟周期為90d的各組大鼠肝細(xì)胞凋亡率相比，其細(xì)胞凋亡率均增高。
　　4．染氟90d、120d，各染氟組肝細(xì)胞拖尾率及遷移長(zhǎng)度均高于相應(yīng)的對(duì)照組，與對(duì)照組、低氟組、中氟組相比，高劑量染氟組的肝細(xì)胞拖尾率及遷移長(zhǎng)度顯著增高(p<0.01)，并且肝細(xì)胞拖尾率及拖尾長(zhǎng)度隨染氟劑量的加大、染氟時(shí)間的延長(zhǎng)而增大。
　　5．不同染氟時(shí)期對(duì)照組大鼠

5、肝組織著色較淺，Caspase-3、Caspase-9陽(yáng)性表達(dá)呈棕黃色或棕褐色。對(duì)照組Caspase-3、Caspase-9蛋白表達(dá)穩(wěn)定，維持在極少量表達(dá)水平，中、高劑量染氟組著色明顯較對(duì)照組深，且120d的染氟組比90d的著色加深，并且隨著染氟劑量增加，各組陽(yáng)性表達(dá)增強(qiáng)，Caspase-3、Caspase-9陽(yáng)性表達(dá)的平均光密度值，高氟組較對(duì)照組、低氟組明顯增大(P<0.01)。
　　6．氟引起了caspase-3和caspas

6、e-9基因表達(dá)水平的改變，與對(duì)照組相比，低、中、高染氟組caspase-3基因表達(dá)量分別是對(duì)照組的0.3369倍、1.3733倍、2.2689倍；低、中、高染氟組caspase-9基因表達(dá)量分別是對(duì)照組的1.0278倍、3.0494倍、5.8495倍。
　　結(jié)論：
　　1．氟可誘導(dǎo)肝組織細(xì)胞凋亡，其凋亡率不僅與染氟劑量之間呈現(xiàn)劑量一效應(yīng)關(guān)系，而且與染氟時(shí)間之間呈現(xiàn)時(shí)間一效應(yīng)關(guān)系。
　　2．氟化物可導(dǎo)致大鼠肝細(xì)胞DNA損