一株枯草芽孢桿菌抗植物病原真菌活性物質(zhì)的研究.pdf

1、枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)被認(rèn)為是一種具有潛在的能有效抑制植物病原真菌并促進(jìn)植物生長(zhǎng)發(fā)育作用的有益菌種。目前，已陸續(xù)從不同的枯草芽孢桿菌菌株中分離得到具有抑制植物病原真菌生長(zhǎng)的脂肽類(lèi)物質(zhì)，包括表面活性素(Surfactin)、伊枯草菌素(Iturin)和芬枯草菌素(Fengycin)。本實(shí)驗(yàn)室分離得到兩株芽孢桿菌RJ-1和RJ-2。通過(guò)傳統(tǒng)的形態(tài)、生理生化鑒定，發(fā)現(xiàn)它們與枯草芽孢桿菌特征相符。基于16SrDNA的進(jìn)

2、一步系統(tǒng)進(jìn)化分析結(jié)果表明，RJ-1和RJ-2均與枯草芽孢桿菌有高度同源性，故鑒定為枯草芽孢桿菌。在RJ-1和RJ-2與植物病原真菌尖孢鐮刀菌黃瓜專(zhuān)屬型(Fusariumoxysporumf.sp.cucumerinum,F.o.c)的平板對(duì)峙實(shí)驗(yàn)中，RJ-1沒(méi)有任何的抑菌作用，而RJ-2則表現(xiàn)出強(qiáng)抑菌效果。進(jìn)一步比較RJ-1和RJ-2搖瓶發(fā)酵胞外代謝物粗提液的HPLC譜圖，發(fā)現(xiàn)RJ-2具有RJ-1所沒(méi)有的特征代謝產(chǎn)物。使用LC-MS液相

3、質(zhì)譜聯(lián)用儀選擇性地對(duì)RJ-2的這部分特征產(chǎn)物進(jìn)行質(zhì)譜分析，推測(cè)主要成分的分子量可能是1477.0、1489.1和1505.1，通過(guò)肽質(zhì)量指紋譜技術(shù)初步鑒定為C17-18FengycinA或者C16-18FengycinB。為了更進(jìn)一步地確定上述結(jié)果，本文使用了高精度的生物質(zhì)譜——MALDI-TOFMS對(duì)RJ-2粗提液在枯草芽孢桿菌分泌的脂肽類(lèi)物質(zhì)所處的900～1600Da分子量區(qū)間內(nèi)進(jìn)行了質(zhì)譜分析，從而發(fā)現(xiàn)RJ-2產(chǎn)生的特征代謝物包括一

4、組分子量相差14Da(CH2)，含量成階梯分布的代謝同系物，分子量依次為1462.8、1476.8、1490.8、1504.8和1518.8。通過(guò)肽質(zhì)量指紋譜技術(shù)鑒定為C14-18FengycinB，其中C17FengycinB含量最高，為其主要成分。此外，還發(fā)現(xiàn)另一組分子量相差14Da(CH2)的碳鏈同系物系列，含量同樣呈現(xiàn)階梯分布，分子量依次為1432.8、1446.8、1460.8、1474.8和1488.8，與C14-18Fen