解淀粉芽孢桿菌YN-1抑制植物病原真菌活性物質(zhì)研究.pdf

1、從鄭州郊區(qū)果園土壤中篩選出一株芽孢桿菌菌株YN-1，該菌株具有廣譜拮抗植物病原真菌作用，其發(fā)酵液在121℃下高壓滅菌20min，然后在4℃下儲(chǔ)存半年，仍然保持對(duì)多種植物病原真菌良好的抑菌活性。通過形態(tài)學(xué)觀察、生理生化特征鑒定、以及16SrDNA和ITS序列同源性分析表明該菌屬于解淀粉芽孢桿菌（Bacillus amyloliquefaciens）。通過綜合分析推測(cè)發(fā)酵液中可能含有生化特性穩(wěn)定的脂肽抗生素。
　　 本研究包括3個(gè)方

2、面的研究?jī)?nèi)容：1．利用已知的脂肽抗生素合成相關(guān)基因序列設(shè)計(jì)4對(duì)特異引物對(duì)解淀粉芽孢桿菌YN-1菌株基因組進(jìn)行基因檢測(cè)。2．按照脂肽抗生素分離純化方法定向?qū)闥N-1發(fā)酵液活性物質(zhì)進(jìn)行提取，獲得粗提物質(zhì)。研究粗提取物質(zhì)的生化特性，并對(duì)粗提物質(zhì)是否為解淀粉芽孢桿菌YN．1發(fā)酵液的主要成分進(jìn)行驗(yàn)證。3．利用HPLC對(duì)活性粗提物質(zhì)進(jìn)行檢測(cè)，探索活性粗提物質(zhì)分離實(shí)驗(yàn)參數(shù)，然后以獲得的HPLC分離參數(shù)為依據(jù)，利用HPLC-ESI-MS和MALDI

3、-TOF-MS檢測(cè)對(duì)活性粗提物進(jìn)行定性定量分析。結(jié)果表明：1．解淀粉芽孢桿菌YN-1基因組中含有sfp、fenB、ituA或bamA基因；2．菌株YN-1發(fā)酵液粗提物特性與脂肽抗生素一致：具有廣譜抑制植物病原真菌活性，并且對(duì)溫度、對(duì)蛋白酶K不敏感。另外通過實(shí)驗(yàn)證實(shí)粗提物質(zhì)為菌株YN-1發(fā)酵液廣譜抗植物病原真菌物質(zhì)的主要組分。3．通過梯度洗脫得到峰型較好、分辨率高的HPLC色譜圖，獲得活性粗提物質(zhì)HPLC分離參數(shù)。LC-ESI-MS和MA

4、LDI-TOF-MS檢測(cè)分析表明活性粗提物中含有C14-IturinA、C15-IturinA、C16-IturinA、C14-FengycinA、C15-FengycinA、C16-FengycinA、C17-FengycinA、C16-FengycinB、C17-FengycinB九種脂肽抗生素，其中C16-IturinA、C14-FengycinA、C16-FengycinA、C17-FengycinA、C17-FengyeinB