A20基因及As2O3對口腔腺樣囊性癌細胞株ACC的作用機制研究.pdf

1、隨著近幾年環(huán)境污染的日益加重，腺樣囊性癌(adenoid cystic carcinoma, ACC)的發(fā)病率呈逐年遞增趨勢。腺樣囊性癌是發(fā)生在口腔頜面部常見的惡性腫瘤，其十年生存率僅為10％，其治療和預防是近年來臨床研究的重點。
　　本課題主要研究A20及As2O3對ACC細胞株的作用機制，進一步闡明ACC發(fā)生轉(zhuǎn)移及凋亡的原因，為臨床生物學及化學治療ACC提供理論基礎。
　　為了篩選出ACC轉(zhuǎn)移相關的基因，通過對口腔臨床腺

2、樣囊性癌高/低轉(zhuǎn)移細胞株ACC-M/ACC-2做基因芯片分析，重復20次后，得到表達有顯著差異的基因：升高表達23條，下降表達43條。經(jīng)信號通路相關因子分析得出：口腔腺樣囊性癌的轉(zhuǎn)移性高低與NFκB信號通路(nuclear factorΚB signal pathway)的激活情況高度相關，相關基因分別為：NFΚB1(P50), NFΚBIA, NFκB3(P65), NFκB2, IκBE, IκKα, A20, ICAM1等8條基因

3、。本研究選取A20基因進一步研究。
　　本研究體外構(gòu)建人A20基因真核表達載體pEGFP-N3-A20，將其轉(zhuǎn)染ACC-2細胞，驗證 A20基因?qū)Φ娃D(zhuǎn)移細胞系ACC-2生物學行為的影響。結(jié)果顯示A20基因?qū)ο贅幽倚园┘毎礎CC-2的生長起抑制作用；A20基因?qū)?NFκB信號通路起抑制作用，并抑制NF-κB的激活；A20基因可以降低ACC-2細胞的轉(zhuǎn)移侵襲能力；A20基因主要通過減少 P65蛋白在細胞核中的表達從而抑制了NF-κB

4、信號通路的激活，可能是影響ACC-2以上生物學行為的靶點。
　　應用不同濃度的As2O3作用于ACC-M、ACC-2細胞后，觀察As2O3對兩種細胞生長狀態(tài)的影響。結(jié)果顯示，As2O3抑制 ACC細胞的生長，并促進細胞凋亡；As2O3可通過促進細胞凋亡使體外培養(yǎng)的ACC-2細胞生長受抑制，而受抑制 ACC-2內(nèi) Survivin mRNA和蛋白表達均下降；As2O3對人腺樣囊性癌ACC-2裸鼠移植瘤有明顯抑制作用，與常規(guī)化療藥5-

5、Fu相比效果更明顯，其作用機制可能為降低 Ki-67表達，抑制腫瘤細胞增殖活性；降低VEGF表達及 MVD值，抑制腫瘤血管生成；下調(diào)Survivin基因的表達，誘導腫瘤細胞凋亡。
　　通過以上實驗，證實了A20基因可以抑制ACC細胞的增殖和轉(zhuǎn)移，其具體機制是通過抑制NF-κB信號通路的激活；As2O3抑制ACC細胞的生長，主要是通過誘導細胞凋亡實現(xiàn)的，其機制可能是：1.線粒體內(nèi)膜的通透性增加，繼而線粒體跨膜電位下降，促凋亡因子與調(diào)