復(fù)方黃黛對(duì)NB-,4-細(xì)胞生長(zhǎng)抑制和促調(diào)亡作用的研究.pdf

1、目的：研究納米雄黃、青黛、復(fù)方黃黛對(duì)急性早幼粒細(xì)胞白血病(APL)細(xì)胞株NB4細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制和促凋亡作用，從而為進(jìn)一步研究復(fù)方黃黛治療APL的作用機(jī)制及其主要有效成分提供佐證。 方法：本實(shí)驗(yàn)將通過對(duì)復(fù)方黃黛拆方研究，以APL細(xì)胞株NB4細(xì)胞為體外模型，實(shí)驗(yàn)組別為四組：空白對(duì)照組、納米雄黃組、青黛組、復(fù)方黃黛組。實(shí)驗(yàn)分為兩部分：(1)四噻唑藍(lán)(MTT)法檢測(cè)藥物處理NB4細(xì)胞后，細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制情況：首先分別應(yīng)用終濃度為0.1875

2、～12mg·L-1納米雄黃、0.235～15.04mg·L-1青黛、0.656～42mg·L-1復(fù)方黃黛處理NB4細(xì)胞24小時(shí)后，應(yīng)用MTT法檢測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)抑制情況，并以藥物濃度對(duì)數(shù)值對(duì)抑制率作線性回歸，得直線方程，從中求出藥物的半數(shù)抑制濃度(IC50)，并將三個(gè)實(shí)驗(yàn)組的生長(zhǎng)抑制率進(jìn)行比較； 再分別應(yīng)用終濃度為1.5mg·L-1納米雄黃、1.88mg·L-1青黛、5.25mg·L-1復(fù)方黃黛處理NB4細(xì)胞，分別在用藥后6小時(shí)、12

3、小時(shí)、24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)用MTT檢測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)抑制情況，并將作用不同時(shí)間的三個(gè)實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制率進(jìn)行比較。利用單因素方差分析(ANOVA)統(tǒng)計(jì)各組間是否具有顯著性差異。 (2)光學(xué)顯微鏡和透射電子顯微鏡觀察藥物處理NB4細(xì)胞后，細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化：分別應(yīng)用終濃度為1.5mg·L-1納米雄黃、1.88mg·L-1青黛、5.25mg·L-1復(fù)方黃黛處理NB4細(xì)胞24小時(shí)后，用瑞士—吉姆薩染色、HE染色和透射電鏡觀察NB4細(xì)

4、胞形態(tài)學(xué)改變。 結(jié)果：(1)MTT法檢測(cè)NB4細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制情況：0.1875～12mg·L-1納米雄黃、0.235～15.04mg·L-1青黛、0.656～42mg·L-1復(fù)方黃黛處理NB4細(xì)胞24小時(shí)后，發(fā)現(xiàn)在這一濃度范圍內(nèi)，抑制程度隨著藥物濃度的增大而逐漸增強(qiáng)。其中，納米雄黃的IC50為8.683mg·L-1，青黛的IC50為3818.172mg·L-1，復(fù)方黃黛的IC50為5.203mg·L-1。 (2)光學(xué)顯微

5、鏡和透射電子顯微鏡觀察NB4細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化：瑞士—吉姆薩染色及HE染色光鏡下觀察，可見納米雄黃組、青黛組、復(fù)方黃黛組處理NB4細(xì)胞中出現(xiàn)凋亡細(xì)胞，細(xì)胞皺縮呈圓形或呈新月形。 結(jié)論：(1)納米雄黃、青黛、復(fù)方黃黛對(duì)急性早幼粒細(xì)胞白血病(APL)細(xì)胞株NB4細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用與時(shí)間、濃度呈正相關(guān)性；在復(fù)方黃黛中主要是納米雄黃抑制APL細(xì)胞株NB4細(xì)胞的增殖，青黛抑制APL細(xì)胞株NB4細(xì)胞增殖的作用極小，但納米雄黃和青黛對(duì)NB4細(xì)胞