羅漢果性別的分子標(biāo)記研究.pdf

1、羅漢果為葫蘆科羅漢果屬的雌雄異株植物，具有重要的醫(yī)療和保健價(jià)值，是廣西特有的經(jīng)濟(jì)植物。羅漢果的栽培需要優(yōu)良的羅漢果雌、雄品種。對羅漢果進(jìn)行雌雄性別的分子標(biāo)記研究，可為羅漢果早期性別鑒定以及雌雄單株選育提供理論基礎(chǔ)。 本研究主要采用隨機(jī)引物擴(kuò)增多態(tài)性DNA(RAPD)技術(shù)和同工酶方法對羅漢果雌雄株進(jìn)行性別分子標(biāo)記等的研究。研究內(nèi)容及結(jié)果如下： 1.以栽培品種青皮果的雌雄株葉片為實(shí)驗(yàn)材料，用隨機(jī)引物S60(ACCCGGTCA

2、C),S90(AGGGCCGTCT)擴(kuò)增得到與羅漢果雄性性別相關(guān)的DNA 分子標(biāo)記。根據(jù)引物名以及片段大小將差異帶分別命名為S90-300、S90-400、S60-750。將這三條差異片段回收、克隆及測序，獲得的序列大小分別為305bp,405bp,746bp。在NCBI 數(shù)據(jù)庫中用BLAST 對這3 個(gè)差異片段進(jìn)行序列同源性比較，結(jié)果表明這3 個(gè)序列與其它生物體DNA 序列同源性較小，且同源序列中未發(fā)現(xiàn)來自羅漢果或葫蘆科的序列，表明這

3、三個(gè)片段為羅漢果中新發(fā)現(xiàn)的DNA 序列。BLAST 分析表明：S90-300 序列中的9bp-305bp 與葡萄的基因組序列有67％同源性；180bp-220bp 與小鼠X 染色體上的41 個(gè)核苷酸有82％的同源性；232bp-260bp 與小鼠X 染色體上的29 個(gè)核苷酸有93％的同源性；201bp-243bp 與人類X 染色體上的43 個(gè)核苷酸有81％的同源性；210bp-244bp 與雞W 染色體上的38 個(gè)核苷酸有86％的同源性

4、。雖然均是來自動(dòng)物的染色體序列,但X、W 染色體均為性染色體，因此我們認(rèn)為S90-300 序列可能與性別基因有一定程度的關(guān)系。S90-400 序列與水稻的第8 條染色體的29 個(gè)核苷酸具有同源性，同源比率為93％。通過分析我們認(rèn)為S90-400 序列與控制不育性的QTL 或是標(biāo)記基因可能有一定的關(guān)系。另外，該序列與雞Z 性染色體上的40個(gè)核苷酸有87％的同源性，因此我們認(rèn)為S90-400 序列可能與性別基因有一定關(guān)系。S60-750 序

5、列在102bp-136bp、443bp-480bp 片段位點(diǎn)分別與小鼠X 染色體上不同位置的37、38 個(gè)核苷酸有89％、86％的同源性；在560bp-584bp 、583bp-610bp 分別與黑猩猩X 染色體的25、28 個(gè)核苷酸有92％、96％的同源性。X 染色體為小鼠、黑猩猩的性染色體，因此我們認(rèn)為S60-750 序列可能與性別基因有較為密切的關(guān)系。 2．以雄株和四個(gè)栽培品種（青皮、長灘、冬瓜、紅毛）羅漢果雌株為實(shí)驗(yàn)材料

6、，通過雄性和雌性羅漢果基因組DNA 池的RAPD-PCR 擴(kuò)增，對115 個(gè)隨機(jī)引物進(jìn)行初步篩選，發(fā)現(xiàn)有8個(gè)引物在雌雄DNA 池中有差異。經(jīng)過重復(fù)性驗(yàn)證，結(jié)果表明：S47（TTGGCACGGG）、S103（AGACGTCCAC）能在雄集群DNA 池中和單株分別擴(kuò)增出約2600bp、1100bp 的雄特異性條帶。而引物S43（AGACGTCCAC）則在所有品種的雌集群DNA 池?cái)U(kuò)增出約650bp 的雌性特異性條帶。本實(shí)驗(yàn)為羅漢果性別連鎖基