PARP-1在氫醌和氯化鎳致細(xì)胞DNA損傷中的應(yīng)用.pdf

1、[目的]
　　 運(yùn)用分子生物學(xué)方法確定聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1(poly(ADP-ribose)polymerase-1，PARP-1)基因缺陷細(xì)胞株的蛋白表達(dá)抑制效率，探討PARP-1缺失對不同劑量氫醌(hydroquinol，HQ)和氯化鎳(nickelchloride，NiCl2)致細(xì)胞DNA損傷的影響，為研究PARP-1基因功能的細(xì)胞及分子機(jī)制提供理論依據(jù)。
　　 [方法]
　　 用實(shí)時熒光定量-聚合酶

2、鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(real time quantitative-polymerase chainreaction，RTQ-PCR)和蛋白免疫印跡法(western blotting)檢測正常、轉(zhuǎn)染空載體及PARP-1基因缺陷的三種支氣管上皮(16HBE)細(xì)胞的PARP-1表達(dá)情況。分別命名此三種細(xì)胞為“16HBE”，“16HBEE"和“16HBEP”。觀察16HBEP細(xì)胞的生長形態(tài)和生長特性。用不同劑量HQ和NiCl2分別染毒16HBE細(xì)胞、1

3、6HBEE細(xì)胞及16HBEP細(xì)胞，檢測微核形成、核異常和DNA損傷情況。
　　 [結(jié)果]
　　 1.以醛脫氫酶(GADPH)作為內(nèi)對照，蛋白免疫印跡實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，16HBEP細(xì)胞的蛋白相對含量分別為16HBE細(xì)胞和16HBEE細(xì)胞的30％和31％，16HBE細(xì)胞和16HBEE細(xì)胞之間差別沒有顯著性，證實(shí)了本次實(shí)驗(yàn)所選取的缺陷細(xì)胞株對PARP-1有較高的抑制效率，符合后續(xù)研究需要。
　　 2.PARP-1基因缺陷和

4、轉(zhuǎn)染的空載體對16HBE細(xì)胞增值能力無明顯影響。
　　 3.三種細(xì)胞分別用不同劑量的HQ和NiCl2染毒24小時，每個劑量組均不同程度的出現(xiàn)微核及核異常；與各自對照組相比，三種細(xì)胞隨著兩種毒物染毒劑量的增加，微核率及核異常率都增加。相同劑量組之間比較，HQ在80μmol/L劑量組與NiCl2在8μmol/L劑量組時，16HBEP細(xì)胞的微核率和核異常率與16HBE細(xì)胞及16HBEE細(xì)胞相比有顯著差異，而在低劑量組差異無顯著性。彗星

5、實(shí)驗(yàn)表明，與各自對照組比較，隨著HQ和NiCl2染毒劑量的增加，三種細(xì)胞拖尾率及彗星尾長明顯增加，屬3級、4級DNA損傷的細(xì)胞比例增加。相關(guān)分析表明，三種細(xì)胞的彗星尾長及拖尾率與HQ和NiCl2間均有劑量-反應(yīng)關(guān)系。相同劑量組之間相比，HQ和NiCl2染毒的各劑量組16HBEP細(xì)胞與16HBE及16HBEE細(xì)胞的彗星尾長及拖尾率均有顯著性差異，16HBEP細(xì)胞的DNA損傷更嚴(yán)重。
　　 [結(jié)論]
　　 用RNA干擾(RN