攜蜂毒素基因重組腺病毒抗肝癌作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、原發(fā)性肝細(xì)胞癌是中國(guó)最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一,"以毒攻毒"是中醫(yī)藥抗癌的重要法則,但許多"以毒攻毒"類中藥都因其本身毒性太大,以及作用無(wú)選擇性而限制了使用.該研究的目的是通過(guò)將編碼蜂毒素的基因用于肝癌的基因治療,為具有較強(qiáng)抗腫瘤作用、然而又有較大毒性的毒蛋白類中藥——蜂毒素能安全應(yīng)用于臨床開(kāi)壁新的途徑,在中西醫(yī)結(jié)合防治腫瘤方面進(jìn)行一些有益的嘗試.該實(shí)驗(yàn)所采用的方法:(1)采用細(xì)菌內(nèi)同源重組法構(gòu)建攜編碼蜂毒基因及甲胎蛋白(AFP)啟動(dòng)子的重組

2、腺病毒,通過(guò)電泳、RT-PCR等方法鑒定質(zhì)粒中蜂毒素基因片段以及重組腺病毒中蜂毒素基因的轉(zhuǎn)錄.(2)以X-gal染色檢測(cè)重組腺病毒體內(nèi)外對(duì)肝癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率,MTT法測(cè)定重組腺病毒體外轉(zhuǎn)染對(duì)AFP陽(yáng)性肝癌細(xì)胞的抑制作用.(3)通過(guò)流式細(xì)胞儀、電泳、RT-PCR、TUNEL等方法觀察攜蜂毒素基因重組腺病毒對(duì)肝癌細(xì)胞周期、增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)、細(xì)胞凋亡及細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)等方法的影響.(4)采用動(dòng)物實(shí)驗(yàn)觀察蜂毒素基因體外轉(zhuǎn)染對(duì)肝癌細(xì)胞致瘤

3、能力的影響及重組腺病毒腫瘤內(nèi)注射對(duì)荷肝癌裸鼠的抑瘤效果.從該研究中初步得出以下結(jié)論:(1)編碼蜂毒素的基因能有效插入重組腺病毒質(zhì)粒中,并能在轉(zhuǎn)染的肝癌細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄和表達(dá),證明動(dòng)物毒基因作為腫瘤目的基因在技術(shù)上具有可行性.(2)復(fù)制缺陷型腺病毒是蜂毒素基因的良好載體,對(duì)肝癌細(xì)胞具有較高的轉(zhuǎn)染效率;蜂毒素基因重組腺病毒轉(zhuǎn)染對(duì)肝癌細(xì)胞具有抑制增殖作用,并與腺病毒滴度呈正相關(guān);AFP啟動(dòng)子可特異驅(qū)動(dòng)蜂毒素基因在分泌AFP的細(xì)胞中表達(dá),從而達(dá)到靶向