葡萄離體葉片再生體系的建立.pdf

1、葡萄的遺傳背景復(fù)雜，育種周期長，常規(guī)育種方法較難實(shí)現(xiàn)品種改良，隨著轉(zhuǎn)基因技術(shù)的出現(xiàn)與逐步發(fā)展，把目的基因轉(zhuǎn)入植株體內(nèi)，可在不改變多種優(yōu)良性狀的前提下定向改良某些性狀，提高育種效率，為葡萄的育種改良提供了一條新途徑。葡萄再生頻率低是造成葡萄遺傳轉(zhuǎn)化困難的關(guān)鍵，使其高效再生是目前葡萄生物技術(shù)育種的主要問題。 本研究以優(yōu)良無核葡萄栽培品種莫利莎(Mellisa)、皇家夏天(Summer Royal)試管苗為試材，對影響葉片離體再生不定

2、芽的因素如基因型、基本培養(yǎng)基成分、生長調(diào)節(jié)劑種類及濃度配比、接種材料類型、接種方式以及培養(yǎng)條件等進(jìn)行了系統(tǒng)研究，成功建立了莫利莎、皇家夏天離體葉片再生體系。 主要研究結(jié)果如下： 1．基因型是影響葡萄離體葉片再生的重要因素，研究表明：相同再生條件下莫利莎的再生效率顯著高于皇家夏天，而且對環(huán)境條件以及生長調(diào)節(jié)劑要求不嚴(yán)格。 2．通過對不同培養(yǎng)基的篩選，確定B<,5>為適合莫利莎、皇家夏天離體葉片再生的基本培養(yǎng)基。碳源

3、為10-20g/L的葡萄糖或食用白砂糖。 3．不同植物生長調(diào)節(jié)劑片再生影響很大。研究發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞分裂素BA和TDZ都可以誘導(dǎo)莫利莎、皇家夏天離體葉片再生不定芽，雖然TDZ誘導(dǎo)的不定芽數(shù)高于BA，但叢生芽畸形較多，不易成苗，故適于莫利莎、皇家夏天葉片再生的細(xì)胞分裂素宜選用BA，濃度分別為4.0mg/L和3.0mg/L；低濃度的生長素就可以誘導(dǎo)兩個品種再生不定芽，IBA與BA配合使用不易誘導(dǎo)產(chǎn)生不定芽，且再生率較低，故誘導(dǎo)莫利莎離體葉片再生不

4、定芽的最適生長素為IAA0.10mg/L，皇家夏天為IAA0.05mg/L。 4．莫利莎和皇家夏天離體再生以試管苗頂端幼嫩葉片為適宜外植體，葉片不同部位再生結(jié)果無顯著差異，莖段和葉柄再生效果差；葉片不同接種方式對不定芽再生無顯著影響。 5．暗培養(yǎng)對葉片再生不定芽是必要的，經(jīng)過暗培養(yǎng)處理可顯著提高葉片再生率，適宜暗培養(yǎng)時間為21d左右。 6．試驗(yàn)表明葡萄繼代苗對潮霉素(Hyg)的敏感性強(qiáng)于卡那霉素，Hyg3.0mg