脂質(zhì)體介導(dǎo)hALR轉(zhuǎn)染綿羊胎兒成纖維細(xì)胞的研究.pdf

1、本文以脂質(zhì)體介導(dǎo)法轉(zhuǎn)染綿羊胎兒成纖維細(xì)胞(sFFCs)，尋找影響脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染sFFCs效率的因素，以期提高轉(zhuǎn)染效率，為轉(zhuǎn)基因綿羊生物反應(yīng)器打下基礎(chǔ)。 首先成功建立了30天綿羊胎兒成纖維細(xì)胞培養(yǎng)體系及優(yōu)化的轉(zhuǎn)染方法，在此基礎(chǔ)上sFFCs能傳代至F<,30>，pNIGBA質(zhì)粒轉(zhuǎn)染率可達(dá)到46％。根據(jù)建系要求，對sFFCs的生物學(xué)性狀進(jìn)行分析結(jié)果如下： 1．培養(yǎng)細(xì)胞形態(tài)為典型的成纖維狀，可根據(jù)對胰蛋白酶的敏感度不同，將其純化

2、。 2．綿羊胎兒成纖維細(xì)胞的生長曲線均呈“S”型，細(xì)胞經(jīng)歷了潛伏期、指數(shù)生長期和平臺期。 3．細(xì)胞冷凍實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，綿羊胎兒成纖維細(xì)胞用DMSO(10％)冷凍，細(xì)胞存活狀態(tài)良好，說明本研究中所采用冷凍保護(hù)劑適合于sFFCs的長期冷凍保存。 4．染色體核型分析綿羊的二倍體染色體數(shù)目為2n=54，在本研究培育體系中能保持二倍體性狀，遺傳性狀穩(wěn)定，可以使綿羊遺傳資源在細(xì)胞水平長久保持下來。 5．Lipofect