抗磺胺藥抗體的制備與免疫分析法的研究.pdf

1、磺胺類藥物是一類重要的具有廣譜抗菌作用的藥物，主要用于預(yù)防和治療細(xì)菌感染性疾病，也常做為飼料添加劑促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)，但不合理的使用造成在動(dòng)物性食品中殘留，可能對(duì)人類的健康造成潛在危害。為了建立快速靈敏的檢測(cè)磺胺藥殘留免疫分析方法，本研究制備了三種磺胺藥(SDM、SN、SMX)抗體，并對(duì)其特性和應(yīng)用進(jìn)行研究，主要研究?jī)?nèi)容和結(jié)果包括以下幾方面：1.采用雜交瘤技術(shù)制備了針對(duì)磺胺甲噁唑(SMX)的單克隆抗體。通過鑒定單抗為IgG1亞型，效價(jià)為1：1

2、05，抗體親和常數(shù)為2.3×108L/mol，分子量為162000dalton，抗體對(duì)三種有機(jī)溶劑甲醇、乙腈和丙酮均有很好的耐受性，與其他磺胺藥無交叉反應(yīng)，結(jié)果表明抗體是特異性的。ELISA測(cè)定游離磺胺甲噁唑，建立的標(biāo)準(zhǔn)曲線在10pg/ml～10ng/ml之間呈良好的線性關(guān)系，線性回歸方程為Y=8.91+19.67857X，50％抑制率時(shí)檢測(cè)限為0.82ng/ml，添加回收率在90％以上。2.合成磺胺甲噁唑全抗原，免疫動(dòng)物制備了多克隆抗

3、體，ELISA測(cè)定表明抗體具有特異性。3.合成磺胺地索辛(SDM)全抗原，免疫動(dòng)物制備了多克隆抗體，ELISA測(cè)定表明抗體具有特異性。多抗與溫敏水凝膠聚合為pNIPA-Ab，熒光標(biāo)記抗原，通過游離SDM與熒光標(biāo)記的抗原競(jìng)爭(zhēng)有限量的pNIPA-Ab，建立控溫相分離免疫分析SDM的方法，測(cè)定SDM的線性范圍為1ng/ml～100μg/ml，50％抑制率時(shí)檢測(cè)限是0.64μg/ml，添加回收率在90％以上。結(jié)果表明控溫相分離免疫分析SDM，可