眼針對腸易激綜合征模型大鼠結(jié)腸組織5-羥色胺代謝及受體表達影響的研究.pdf

1、目的：
　　 本研究以分子生物學(xué)、形態(tài)學(xué)等檢測技術(shù)，檢測眼針治療對IBS模型大鼠結(jié)腸和血清5-HT及5-HIAA水平，結(jié)腸EC細胞表達，結(jié)腸TPH1、SERT、5-HT3R和5-HT4R蛋白和mRNA表達水平的影響，旨在從分子水平探討眼針治療IBS的5-HT機制，為眼針治療IBS提供實驗依據(jù)。
　　 材料與方法：
　　 1.動物造模及眼針治療
　　 健康SPF級Wistar雄性大鼠30只，分成對照組、模型

2、組、眼針組，采用束縛刺激與應(yīng)激刺激相結(jié)合的方法建立IBS動物模型。模型組、眼針組每日放入自制束縛性鼠籠1h進行束縛刺激，并每日依次交替進行一項下列應(yīng)激刺激：①禁水24h②置于溫箱40℃，5min③電擊刺激30V，電擊5s間歇5s共120s④冷水游泳14℃，5min⑤禁食24h⑥夾尾180s：共循環(huán)3次計18日造模結(jié)束。對照組無處理。
　　 眼針組在IBS大鼠造模成功后第二天開始，取下焦區(qū)、大腸區(qū)、肝區(qū)、脾區(qū)針刺，定位參照人體取穴

3、方法；用31號13mm毫針，于大鼠眶周2mm處平刺，進針3mm，留針20min，留針期間捻轉(zhuǎn)行針3次，每次1min，每12h針刺1次，針刺7天。
　　 2.指標檢測
　　 采用免疫組化方法檢測結(jié)腸EC細胞并進行分析；ELISA法檢測血清和結(jié)腸5-HT和5-HIAA水平；Western-Blot法、RT-PCR法檢測結(jié)腸TPH1、SERT、5-HT3R、5-HT4R的蛋白和mRNA表達。
　　 結(jié)果：
　　

4、 1.眼針對IBS模型大鼠一般狀態(tài)影響
　　 實驗過程中動物無死亡。與對照組比較，IBS模型大鼠出現(xiàn)易怒好斗、毛色晦暗、食欲下降等表現(xiàn)；稀便狀態(tài)持續(xù)存在，慢性腹瀉形成；觀察結(jié)腸病理學(xué)、結(jié)腸轉(zhuǎn)運功能和腸道敏感性等的變化對模型進行評價，依據(jù)成模標準表明造模成功。經(jīng)過眼針治療后大鼠一般狀態(tài)明顯改善，便質(zhì)及轉(zhuǎn)運功能逐漸恢復(fù)正常。眼針對腸易激綜合征模型大鼠結(jié)腸5-羥色胺代謝及受體表達影響的研究
　　 2.眼針對IBS模型大鼠結(jié)腸5

5、-HT和5-HIAA水平的影響
　　 與對照組比較，模型組5-HT和5-HIAA水平均升高（P<0.05），5-HT轉(zhuǎn)化百分率也升高（P<0.05）；而與模型組比較，眼針組5-HT和5-HIAA水平下降（P<0.05），眼針組5-HT轉(zhuǎn)化百分率降低（P<0.05）。
　　 3.眼針對IBS模型大鼠結(jié)腸EC細胞表達的影響
　　 與對照組比較，模型組5-HT免疫陽性細胞數(shù)量增多（P<0.05），免疫組化染色強度也增強

6、（P<0.05）；與模型組比較，眼針組5-HT免疫陽性細胞數(shù)量、免疫組化染色強度顯著降低（P<0.05）。
　　 4.眼針對IBS模型大鼠結(jié)腸TPH1和SERT表達水平的影響
　　 與對照組比較，模型組TPH1的蛋白和mRNA表達均上調(diào)（P<0.05）；與模型組比較，眼針組TPH1表達下調(diào)（P<0.05）。與對照組比較，模型組SERT的蛋白和mRNA表達均下調(diào)（P<0.05）；而與模型組比較，眼針組SERT表達上調(diào)（P<

7、0.05）。
　　 5.眼針對IBS模型大鼠結(jié)腸5-HT3R和5-HT4R表達水平的影響
　　 與對照組比較，模型組5-HT3R的蛋白和mRNA表達均上調(diào)（P<0.05）；而與模型組比較，眼針組5-HT3R表達下調(diào)（P<0.05）。與對照組比較，模型組5-HT4R的蛋白和mRNA表達均下調(diào)（P<0.05）；而與模型組比較，眼針組5-HT4R表達上調(diào)（P<0.05）。
　　 眼針治療通過下調(diào)結(jié)腸EC細胞及TPH1表

8、達而降低了5-HT合成代謝水平，同時通過上調(diào)SERT的表達而提高5-HT分解代謝水平，使5-HT的合成與分解得以相匹配而協(xié)調(diào)，5-HT恢復(fù)到正常水平，進而IBS大鼠結(jié)腸功能得以恢復(fù)正常。眼針治療下調(diào)5-HT3R表達，上調(diào)5-HT4R表達，使兩者恢復(fù)至正常水平，這可能是眼針治療IBS的機制之一。
　　 結(jié)論：
　　 1.IBS模型大鼠結(jié)腸和血清5-HT和5-HIAA水平升高，5-HT轉(zhuǎn)化百分率也升高；眼針治療可降低5-HT