眼針對腹瀉型腸易激綜合征模型大鼠結腸VIP及其受體1表達影響.pdf

1、目的：
　　 應用分子生物學實驗技術，觀測眼針對腹瀉型腸易激綜合征（Diarrhea-predominant-irritable bowel syndrome，D-IBS）模型大鼠結腸血管活性腸肽（vasoactive intestinal peptide，VIP）及其受體1（VIP1-R）表達影響，探討眼針治療D-IBS的作用機制，為眼針治療D-IBS的科學內涵提供實驗依據(jù)。
　　 方法：
　　 健康SPF級雄

2、性Wistar大鼠，體重200±20g，共40只。按體重分成4組，即對照組、模型組、眼針組、匹維溴胺組（下簡稱西藥組），分籠飼養(yǎng)，每籠5只，共計8籠。采用應激結合束縛的方法復制D-IBS動物模型，經過18d造模，按照模型評價標準鑒定模型，模型復制成功。對照組予以等容量的生理鹽水灌胃18d，自由攝取標準飲食和水，無刺激飼養(yǎng)7d；模型組造模結束后，自由攝取標準飲食和水，無刺激飼養(yǎng)7d；予針灸組7d的眼針治療；西藥組依據(jù)“等效劑量”原則，以1

3、5mg/kg千克的匹維溴胺灌胃給藥7d。標本采集：治療結束后將大鼠處死，取距肛門10cm處結腸1-2cm，用眼科剪刀延結腸長軸將結腸展開，用生理鹽水沖洗干凈，用滅菌錫紙包好結腸組織并且明確標號后，放在-70℃保存，備用。應用逆轉錄聚合酶鏈反應（RT-PCR）方法檢測各組大鼠結腸組織VIP及VIP1-R mRNA的表達，用ELISA方法檢測各組大鼠結腸組織中VIP相對含量，用免疫組化方法檢測各組大鼠結腸組織VIP及VIP1-R蛋白的表達并

4、進行分析。應用SPSS10.0統(tǒng)計軟件。
　　 結果：
　　 1.排便粒數(shù)顯示：與對照組比較，模型組、眼針組、西藥組排出糞便顆粒明顯增加（P<0.01）。排出玻璃小球時間顯示：與對照組比較，模型組、眼針組、西藥組排出玻璃小球時間顯著縮短（P<0.01）。大鼠的腹部回縮反射半定量評分顯示：與對照組比較，模型組、眼針組、西藥組大鼠結腸擴張時大鼠腹肌收縮反應進行半定量評分明顯升高且差異性顯著（P<0.01）。大鼠結腸組織病理學

5、顯示：各組大鼠結腸組織結構正常，結腸粘膜上皮呈單層柱狀，固有層可見粘膜肌層，疏松的粘膜下層外可見肌層。粘膜上皮完整，均無充血、水腫、潰瘍，無炎癥細胞浸潤間質無水腫等病理組織學改變，表明D-IBS模型復制成功。
　　 2.以β-actin作為內參，與對照組比較，模型組結腸組織中VIP及VIP1-R mRNA表達上調（P<0.01）；與模型組比較，眼針組與西藥組結腸組織中VIP及VIP1-R mRNA表達下調（P<0.01）；眼針組

6、與西藥組兩組間結腸組織中VIP及VIP1-R mRNA表達比較均無顯著性差異（P>0.05）。
　　 3.ELISA方法檢測所示：與對照組比較，模型組結腸組織中VIP相對含量顯著上升（P<0.01）；與模型組比較，眼針組與西藥組結腸組織中VIP相對含量明顯降低（P<0.01）；后兩者組間比較無顯著性差異（P>0.05）。
　　 4.免疫組化法檢測顯示：與對照組比較，模型組結腸組織中VIP及VIP1-R蛋白表達明顯上調（P

7、<0.01）；與模型組比較，眼針組與西藥組結腸組織中VIP及VIP1-R蛋白表達明顯下調（P<0.01）；后兩者組間比較無顯著性差異（P>0.05）。
　　 結論：
　　 1 D-IBS模型大鼠排便粒數(shù)增多、排出玻璃小球時間縮短、大鼠的腹部回縮反射半定量評分達到2分以上、大鼠結腸組織病理學無改變。
　　 2 D-IBS模型大鼠結腸組織中VIP相對含量上升、VIP mRNA及蛋白表達上調；眼針能使結腸組織中VIP相