便秘型腸易激綜合征患者結(jié)腸異常表達(dá)蛋白質(zhì)的篩選及鑒定.pdf

1、[背景與目的] 腸易激綜合征(IBS)是一種臨床常見(jiàn)的疾病，目前認(rèn)為IBS是一個(gè)功能性腸病，功能的異常必然有其物質(zhì)的基礎(chǔ)，但究竟哪些細(xì)胞或分子參與了IBS的病理生理尚不清楚。本研究利用蛋白質(zhì)組學(xué)的技術(shù)去研究便秘型腸易激綜合征(C-IBS)患者結(jié)腸粘膜組織與正常人結(jié)腸粘膜組織間蛋白質(zhì)表達(dá)的差異，旨在發(fā)現(xiàn)差異蛋白分子，為IBS的發(fā)病機(jī)制尋求新的研究方向。 [材料與方法] C-IBS組8例，按羅馬Ⅱ腸易激綜合征診斷標(biāo)準(zhǔn)，男女各半；對(duì)照

2、組5例，為健康志愿者。結(jié)腸鏡下于回肓部及乙狀結(jié)腸各活檢3塊，在含0.1％苯甲基磺酰氟(PMSF)的冰鹽水中洗凈后，立即置于液氮中保存。提取標(biāo)本蛋白后，按照Gorg A的方法進(jìn)行雙向凝膠電泳。一向?yàn)榈入娋劢梗驗(yàn)槭榛撬徕c-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)對(duì)蛋白提取液按照分子量不同進(jìn)行二維分離。對(duì)凝膠進(jìn)行染色固定，采用硝酸銀染色法，掃描儀掃描獲取圖像。圖像使用Image Master 2D Elite軟件分析配比，篩選出在C-

3、IBS組與對(duì)照組之間有明顯表達(dá)差異的蛋白質(zhì)點(diǎn)，蛋白質(zhì)鑒定采用質(zhì)譜法。 [結(jié)果] 利用雙向電泳技術(shù)成功得到各組結(jié)腸粘膜組織的2-DE圖譜以及兩組平均膠圖譜，分析平均膠圖譜：對(duì)照組顯示蛋白質(zhì)點(diǎn)為834個(gè)，C-IBS組為581個(gè)，兩組間圖像平均匹配率76.77％。兩組間表達(dá)有三倍或以上差異的蛋白有26個(gè)，對(duì)其中10個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)進(jìn)行鑒定，獲得了4個(gè)在C-IBS組表達(dá)上調(diào)的蛋白，分別是：核糖體蛋白SA、鳥(niǎo)嘌呤核苷酸結(jié)合蛋白、細(xì)胞內(nèi)氯離子通道