黃花蒿EβF合成酶基因及麥長管蚜蛻皮素受體基因USP和EcR的克隆和遺傳轉化.pdf

1、麥蚜是小麥生產(chǎn)中的主要害蟲，蚜蟲危害還能傳播各種病毒病，造成小麥減產(chǎn)和品質下降。本研究利用已經(jīng)分離克隆到的黃花蒿(Artemisia annua)的[反]-β-法尼烯（EβF）合成酶基因，構建農(nóng)桿菌表達載體，并通過農(nóng)桿菌介導法獲得轉基因小麥。此外分離克隆了麥長管蚜蛻皮素受體基因(EcR)和超氣門蛋白基因(USP)，合成上述基因dsRNA后進一步飼喂蚜蟲，研究了RNAi干涉上述基因的效果及構建干擾上述基因載體轉化小麥，實現(xiàn)小麥抗蚜的可行性

2、。主要研究結果如下:
　　1.利用實驗室已經(jīng)克隆到的黃花蒿EβF合成酶基因(HHH)，采用DNA重組技術構建了融合該基因的雙元表達載體185 HHH-167 Bar。
　　2.以六倍體小麥KN199為受體材料，采用農(nóng)桿菌介導小麥幼胚的遺傳轉化技術，建立了表達EβF合成酶基因（HHH）的7個轉基因株系，分別為K01-1-1、K01-3-5、K01-1-6、K02-1-4、K02-5-4、KHH-1-5和KH-5。上述株系均具有

3、Bar抗性。另獲得未檢測到EβF合成酶基因（HHH）但Bar基因呈陽性的5個株系，分別為K01-3-6、K02-2-5、K02-3-4、K03-1-1和K06-3-4。以獲得的EβF合成酶轉基因株系為材料，對HHH的功能和表達特性進行了分析，為進一步分析轉基因植株蚜蟲趨避特性及供試基因對天敵的影響奠定了基礎。
　　3.根據(jù)序列保守區(qū)設計基因擴增特異引物，克隆了麥長管蚜蛻皮素受體基因EcR和超氣門蛋白基因USP。以麥長管蚜的cDNA

4、為模板，使用體外轉錄試劑盒合成了上述基因的dsRNA。
　　4.利用合成的EcR和USP的dsRNA進行了蚜蟲飼喂和抗蚜研究，期間以飼喂干擾蚜蟲生長發(fā)育導致蚜蟲生殖死亡的唾液腺表達基因COO2和飼喂綠色熒光蛋白基因GFP分別作陽性和陰性對照。結果表明，飼喂7.5 ng/μLEcR和USP dsRNA濃度抗蚜效果顯著，誘發(fā)的蚜蟲死亡率與喂食COO2的效果相當。表明EcR和USP具有顯著的抗蚜效果。
　　5.用EcR和USP d