麥長(zhǎng)管蚜G蛋白β和γ亞基的基因克隆及其相互作用蛋白的篩選.pdf

1、該文選擇小麥上的重大害蟲麥長(zhǎng)管蚜作為實(shí)驗(yàn)材料,利用RT-PCR技術(shù)及RACE方法進(jìn)行異源三聚體G蛋白β和γ亞基的基因克隆,并利用酵母雙雜交系統(tǒng)研究已克隆的麥長(zhǎng)管蚜β和γ亞基之間是否互作,并篩選與其相關(guān)的作用蛋白.該研究取得如下主要結(jié)果:(1)從麥長(zhǎng)管蚜中首次克隆了G蛋白β和γ兩個(gè)亞基基因,已被GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)收錄,登錄號(hào)分別為AY205294和AY339875.根據(jù)氨基酸序列同源性比較結(jié)果,初步推測(cè)克隆的麥長(zhǎng)管蚜β和γ亞基與果蠅的β

2、1和γ1亞型、哺乳動(dòng)物的β2和γ7亞型相似.(2)用半定量RT-PCR方法對(duì)麥長(zhǎng)管蚜G蛋白β和γ亞基基因進(jìn)行了組織和蟲期的轉(zhuǎn)錄平研究.結(jié)果表明,兩個(gè)亞基的基因在麥長(zhǎng)管蚜各蟲期及頭、胸和腹部都能轉(zhuǎn)錄,且頭部的轉(zhuǎn)錄水平最高.麥長(zhǎng)管蚜G蛋白β和γ亞基的這種組織分布廣泛性,可能預(yù)示其參與細(xì)胞的多種信號(hào)傳導(dǎo)途徑.(3)通過構(gòu)建麥長(zhǎng)管蚜的cDNA文庫(kù),用克隆的β亞基做誘餌進(jìn)行酵母雙雜交篩選,得到與其相互作用的蛋白.(4)用酵母雙雜交系統(tǒng)研究克隆的麥

3、長(zhǎng)管蚜G蛋白β和γ亞基之間是否存在互作.在生物體內(nèi),G蛋白β和γ亞基只有結(jié)合成二聚體才具有信號(hào)傳導(dǎo)的功能.(5)克隆了麥長(zhǎng)管蚜小G蛋白R(shí)ho家族Cdc42的基因,在GenBank中的登錄號(hào)為AY581120.Cdc42也是一類結(jié)合GTP且具有GTP酶活性的信號(hào)傳導(dǎo)蛋白,它能通過調(diào)節(jié)細(xì)胞骨架肌動(dòng)蛋白的聚合來控制昆蟲翅脈(Crossveins)的分化.(6)克隆了麥長(zhǎng)管蚜肌動(dòng)蛋白基因的部分cDNA序列.獲得了四個(gè)陽性克隆,通過序列比較分析,