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1、華南理工大學(xué)碩士學(xué)位論文維生素E合成途徑關(guān)鍵酶基因的克隆及轉(zhuǎn)基因植株構(gòu)建姓名:葉從勇申請學(xué)位級別:碩士專業(yè):發(fā)酵工程指導(dǎo)教師:鄭穗平20090401ABSTRACTAmaranthuscaudatusLinn,anannualherb,isverynutritiousandcontainsahighqualityofvitaminsandaproteinthatisrichintheaminoacidlysineItalsocontai
2、nsgoodquantitiesofcalcium,phosphorus,iron,potassium,zincandSOoninseedTheleavesandrootshavemanymedicalpropertiesandCanbeusedassilageforanimalsProfitingfromtheresearchesonthevitaminEbiosyntheticpathwaysinplantinrecentyears
3、,twokeyenzymesinvolvedintocopherolsynthesisinArabidopsiswereclonedAndbyusingAgrobacteriumTumefaciensLBA4404,harboringrecombinedpBI121plasmid,asdonorstrains,Ytocopherolmethyltransferase(YTMT/vte4)wasintroducedintoAmaranth
4、uscaudatus,expectingthatthelevelsofvitaminEinAmaranthuscaudatusCanbeelevatedspeciallythelevelofa—tocopherol,SOthatmoreeconomicvalueisaddedtothecropandthestandardofhumanhealthandnutritionCanbeimprovedThemainresearchworkan
5、dresultsareasfollows:1Theeffectsof6BAandNAAinmediumoncotyledonarynodeswerestudiedtoestablishthehighfrequencyregenerationsystemofAmaranthuscaudatusTheresultsshowedthattheoptimalmediumcompositionsforbudsregenerationfromcot
6、yledonnodesWasMS30mg/L6BA3%sucrose08%agarandtheoptimalmediumcompositionsforsegementproliferationWasMSI0mg/L6BA02mg/LNAA3%sucrose08%agar,pH=58。2TotalRNAwasisolatedfromshootsof2一weekoldArabidopsisthalianaplantsandtheeDNAof
7、Arabidopsishomogentisatephytyltransferasephytyltransferase(HPT/vte2)andYtocopherolmethyltransferase(Y—TMT/vte4)WaspreparedbytwostepRT—PCRandthenreplacethegusgeneonpBll21plasmidtoconstructtwecombinedplasmidsnamedpBI121一HP
8、TandpBI121TMTrespectively,whichweretransformedintoLBA44043TheeffectofCefotaxime(Cef)onLBA4404andcotyledonarynodeswerestudiedTheconcentrationgradientexperimentshowedthattheCefcouldrestrainthegrowingofLBA4404whenitsconcent
9、rationreaches300mgfLormore,whichWasthetolerantconcentrationforAmaranthuscaudatus;150mg/LKaninMSmediumWasthecriticalsensitiveconcentrationforbudsregenerationfromcoty’ledonnode;ThetransformationefficiencyWOuLdbeincreasedob
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