螺內(nèi)酯對(duì)白蛋白誘導(dǎo)人腎小管上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化的影響.pdf

1、目的：
　　 探討螺內(nèi)酯(spironolactone，SPI)對(duì)人白蛋白(albumin，Alb)誘導(dǎo)的人近端腎小管上皮細(xì)胞(HK-2)發(fā)生轉(zhuǎn)分化的影響，以及該過程是否通過TGF-β1/Smads信號(hào)通路發(fā)揮作用。
　　 方法：
　　 體外培養(yǎng)人HK-2細(xì)胞，待長滿至80％～85％后同步24小時(shí)，隨機(jī)分為7組：A組(未加刺激物)、B組(加入10-7mol/l螺內(nèi)酯)、C組(加入5mg/ml白蛋白)、D組(5mg

2、/ml白蛋白+10-8mol/l螺內(nèi)酯)、E組(5mg/ml白蛋白+10-7mol/l螺內(nèi)酯)、F組(5mg/ml白蛋白+10-6mol/l螺內(nèi)酯)、G組(先加10umol/lTGF-β1拮抗劑+30min后加入5mg/ml白蛋白)。采用RT-PCR檢測TGF-β1和ILK的mRNA表達(dá)；細(xì)胞免疫熒光檢測α-SMA蛋白、E-cadherin蛋白的表達(dá)；ELISA法檢測細(xì)胞上清液中的FN蛋白水平。
　　 結(jié)果：
　　 光鏡

3、下觀察細(xì)胞細(xì)胞形態(tài)變化發(fā)現(xiàn)，正常HK-2為橢圓形或梭形，呈鵝卵石樣排列；受刺激后細(xì)胞胞體變長，細(xì)胞間隙變大。RT-PCR檢測結(jié)果表明：C組TGF-β1和ILK的mRNA較其他各組表達(dá)明顯增高(P<0.01)；D組、E組、F組TGF-β1和ILK的mRNA表達(dá)逐漸下降，兩組間比較差異有顯著性(P<0.05)；與C組比較，G組TGF-β1mRNA表達(dá)無顯著差異(P>0.05)，而ILKmRNA表達(dá)明顯下降(P<0.01)。細(xì)胞免疫熒光檢測結(jié)

4、果顯示：C組α-SMA蛋白表達(dá)較其他各組明顯增高，而E-cadherin表達(dá)則明顯下降(P<0.01)；D組、E組、F組α-SMA蛋白的表達(dá)逐漸下降，E-cadherin蛋白的表達(dá)逐漸增高(P<0.05)；與C組比較，G組E-cadherin和α-SMA蛋白的表達(dá)有顯著差異(P<0.05)。ELISA檢測結(jié)果表明：C組細(xì)胞上清液中FN蛋白的水平顯著高于其他各組(P<0.01)；D組、E組、F組FN蛋白的水平逐漸降低(P<0.05)；與C