新型陽離子磷酸膽堿聚合物載AT1受體反義寡核苷酸對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠血壓及心血管重構(gòu)的研究.pdf

1、目的：觀察新型陽離子磷酸膽堿聚合物MPC30-DEA70(PC聚合物)在Sprague-Dawley(SD)大鼠各臟器的分布；觀察新型陽離子磷酸膽堿聚合物MPC30-DEA70能否有效地轉(zhuǎn)染針對(duì)AT1R的反義寡核苷酸；探討新型陽離子磷酸膽堿聚合物MPC30-DEA70作為非病毒類轉(zhuǎn)基因載體，通過運(yùn)載AT1R反義寡核苷酸，對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠血壓及心血管重構(gòu)的影響，為PC聚合物作為藥物基因治療載體在心血管疾病中的運(yùn)用奠定基礎(chǔ)。
　　方

2、法：1.應(yīng)用熒光倒置顯微鏡觀察PC聚合物和MPC30-DEA70/FAM-AS-ODN在SD大鼠各臟器的分布。2.將MPC30-DEA70/AT1R AS-ODN復(fù)合物經(jīng)尾靜脈轉(zhuǎn)染進(jìn)入自發(fā)性高血壓大鼠體內(nèi)，應(yīng)用袖套尾動(dòng)脈測壓法，觀察大鼠血壓變化。3.應(yīng)用天狼星紅染色技術(shù)觀察主動(dòng)脈、心肌組織膠原纖維沉淀情況。4.Western blot法檢測大鼠轉(zhuǎn)染MPC30-DEA70/AT1R AS-ODN復(fù)合物后，主動(dòng)脈、心臟AT1R蛋白表達(dá)。5.

3、RT-PCR法檢測大鼠轉(zhuǎn)染MPC30-DEA70/AT1R AS-ODN復(fù)合物后，主動(dòng)脈、心臟AT1R mRNA表達(dá)。
　　結(jié)果：1.FAM-MPC30-DEA70能夠安全、有效地進(jìn)入大鼠腎臟、肝臟等器官，當(dāng)劑量大時(shí)呈現(xiàn)一定的毒性。2.袖套尾動(dòng)脈測壓法發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)染復(fù)合物組與藥物組自發(fā)性高血壓大鼠血壓下降，血壓下降程度隨N/P比值增大而增加，空白對(duì)照組與N/P=0:1組血壓持續(xù)上升，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。3.天狼星紅染色

4、觀察到藥物組和轉(zhuǎn)染復(fù)合物組主動(dòng)脈、心肌組織細(xì)胞間質(zhì)中膠原纖維沉積減輕，而空白對(duì)照組和N/P=0:1組主動(dòng)脈壁增厚、膠原纖維大量沉積、心肌細(xì)胞肥大、排列紊亂。4.Western blot法檢測到轉(zhuǎn)染復(fù)合物組AT1受體蛋白表達(dá)較對(duì)照組下降(P<0.05)，而藥物組、N/P=0:1組AT1受體蛋白表達(dá)較空白對(duì)照組無明顯區(qū)別。5.RT-PCR法檢測到轉(zhuǎn)染復(fù)合物組AT1受體mRNA表達(dá)下降(P<0.05)，而藥物組、N/P=0:1組AT1受體mR