鴨腸炎病毒gC基因疫苗誘導BALB-c小鼠免疫發(fā)生的研究.pdf

1、鴨病毒性腸炎(Duck viral enteritis，DVE)又稱鴨瘟(Duck piague，DP)由鴨腸炎病毒(Duck enteritis virus，DEV)引起的，發(fā)生于鴨、鵝及多種雁形目動物的一種的急性、高度接觸性傳染病?；蛞呙缫云洫毺氐膬?yōu)勢在基因工程疫苗研究中備受關注。
　　 本研究對DEVgC的理論免疫原性和gC基因疫苗對BALB/c小鼠的免疫原性及其免疫佐劑等開展系列研究，獲得以下結果：
　　 1.

2、鴨腸炎病毒gC基因免疫原性理論預測：同源性分析顯示DEVgC與MDV-1、MDV-2gC的同源性最高和親緣關系最近；功能預測顯示DEVgC可能屬于免疫反應基因范疇，具有細胞外膜蛋白功能和酶性質(zhì)，但不屬于任何一種酶類，進一步對其結構與功能預測發(fā)現(xiàn)21～54、48～68、160～200aa可能與肝素結合有關，29～110aa與gC阻礙備解素與C3b結合有關，168～225和254～332aa與gC與C3b結合有關：細胞表位的預測顯示DEVg

3、C存在豐富的T和B細胞表位，表明DEVgC可能具有良好免疫原性。
　　 2.殼聚糖作為pcDNA-DEV-gC疫苗遞送載體：制備和生物學特性研究：殼聚糖/DEVgC基因疫苗復合物制備標準化，具有較高的重現(xiàn)性，包封率為95.6％±0.8，形態(tài)均一，呈球形，直徑在50-80nm之間，4℃能夠穩(wěn)定保存，低質(zhì)粒降解率，轉(zhuǎn)染率較好，低細胞毒性。因此，殼聚糖是DEVgC基因疫苗安全有效遞送載體。
　　 3.陽性脂質(zhì)體作為pcDNA-

4、DEV-gC疫苗遞送載體：制備和生物學特性研究：陽性脂質(zhì)體/DEVgC基因疫苗復合物制備標準化，具有較高的重現(xiàn)性，包封率為76.4％±0.8，形態(tài)均一，呈球形，直徑在400-700nm之間，4℃能夠穩(wěn)定保存，低質(zhì)粒降解率，轉(zhuǎn)染率高，低細胞毒性。因此，陽性脂質(zhì)體是DEVgC基因疫苗安全有效的遞送載體。
　　 4.檢測鼠抗DEV特異性血清IgG和腸道分泌IgA的間接ELISA方法的建立：兩種間接ELISA方法的抗原包被濃度分別為0.

5、5μg/ml和1μg/ml，一抗工作濃度分別為1:8和原液，酶標抗體工作濃度為1:5000和1:8000，一抗孵育溫度和時間都為37℃1h，酶標抗體孵育溫度和時間分別為37℃1h和37℃2h，底物作用時間都為40min，陰陽性臨界值分別為0.259和0.297，具有良好的特異性和重復性，為基因疫苗的體液免疫和粘膜免疫檢測提供了穩(wěn)定的檢測方法。
　　 5.鴨腸炎病毒gC基因疫苗誘導BALB/c小鼠免疫發(fā)生的研究：pcDNA-DEV

6、-gC基因疫苗能夠誘導小鼠產(chǎn)生一定程度的細胞免疫、體液免疫和粘膜免疫?；驑屴Z擊和肌注途徑誘導T淋巴細胞增殖、CD4+和CD8+T淋巴細胞免疫應答優(yōu)于口服途徑，基因槍轟擊誘導體液免疫應答的能力較肌注和口服途徑強，三種免疫途徑中僅口服途徑產(chǎn)生黏膜反應?；驑屴Z擊細胞和體液免疫應答具有一定的劑量相關性，而肌肉注射僅在細胞免疫方面。遞送載體可顯著提高機體的細胞免疫和粘膜免疫水平，其中陽性脂質(zhì)體偏重細胞免疫，殼聚糖偏重粘膜免疫，具有良好的佐劑效