鴨腸炎病毒gC基因疫苗誘導(dǎo)BALB-c小鼠免疫發(fā)生的研究.pdf

1、鴨病毒性腸炎(Duck viral enteritis，DVE)又稱鴨瘟(Duck piague，DP)由鴨腸炎病毒(Duck enteritis virus，DEV)引起的，發(fā)生于鴨、鵝及多種雁形目動(dòng)物的一種的急性、高度接觸性傳染病?；蛞呙缫云洫?dú)特的優(yōu)勢(shì)在基因工程疫苗研究中備受關(guān)注。
　　 本研究對(duì)DEVgC的理論免疫原性和gC基因疫苗對(duì)BALB/c小鼠的免疫原性及其免疫佐劑等開(kāi)展系列研究，獲得以下結(jié)果：
　　 1.

2、鴨腸炎病毒gC基因免疫原性理論預(yù)測(cè)：同源性分析顯示DEVgC與MDV-1、MDV-2gC的同源性最高和親緣關(guān)系最近；功能預(yù)測(cè)顯示DEVgC可能屬于免疫反應(yīng)基因范疇，具有細(xì)胞外膜蛋白功能和酶性質(zhì)，但不屬于任何一種酶類，進(jìn)一步對(duì)其結(jié)構(gòu)與功能預(yù)測(cè)發(fā)現(xiàn)21～54、48～68、160～200aa可能與肝素結(jié)合有關(guān)，29～110aa與gC阻礙備解素與C3b結(jié)合有關(guān)，168～225和254～332aa與gC與C3b結(jié)合有關(guān)：細(xì)胞表位的預(yù)測(cè)顯示DEVg

3、C存在豐富的T和B細(xì)胞表位，表明DEVgC可能具有良好免疫原性。
　　 2.殼聚糖作為pcDNA-DEV-gC疫苗遞送載體：制備和生物學(xué)特性研究：殼聚糖/DEVgC基因疫苗復(fù)合物制備標(biāo)準(zhǔn)化，具有較高的重現(xiàn)性，包封率為95.6％±0.8，形態(tài)均一，呈球形，直徑在50-80nm之間，4℃能夠穩(wěn)定保存，低質(zhì)粒降解率，轉(zhuǎn)染率較好，低細(xì)胞毒性。因此，殼聚糖是DEVgC基因疫苗安全有效遞送載體。
　　 3.陽(yáng)性脂質(zhì)體作為pcDNA-

4、DEV-gC疫苗遞送載體：制備和生物學(xué)特性研究：陽(yáng)性脂質(zhì)體/DEVgC基因疫苗復(fù)合物制備標(biāo)準(zhǔn)化，具有較高的重現(xiàn)性，包封率為76.4％±0.8，形態(tài)均一，呈球形，直徑在400-700nm之間，4℃能夠穩(wěn)定保存，低質(zhì)粒降解率，轉(zhuǎn)染率高，低細(xì)胞毒性。因此，陽(yáng)性脂質(zhì)體是DEVgC基因疫苗安全有效的遞送載體。
　　 4.檢測(cè)鼠抗DEV特異性血清IgG和腸道分泌IgA的間接ELISA方法的建立：兩種間接ELISA方法的抗原包被濃度分別為0.

5、5μg/ml和1μg/ml，一抗工作濃度分別為1:8和原液，酶標(biāo)抗體工作濃度為1:5000和1:8000，一抗孵育溫度和時(shí)間都為37℃1h，酶標(biāo)抗體孵育溫度和時(shí)間分別為37℃1h和37℃2h，底物作用時(shí)間都為40min，陰陽(yáng)性臨界值分別為0.259和0.297，具有良好的特異性和重復(fù)性，為基因疫苗的體液免疫和粘膜免疫檢測(cè)提供了穩(wěn)定的檢測(cè)方法。
　　 5.鴨腸炎病毒gC基因疫苗誘導(dǎo)BALB/c小鼠免疫發(fā)生的研究：pcDNA-DEV

6、-gC基因疫苗能夠誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生一定程度的細(xì)胞免疫、體液免疫和粘膜免疫?；驑屴Z擊和肌注途徑誘導(dǎo)T淋巴細(xì)胞增殖、CD4+和CD8+T淋巴細(xì)胞免疫應(yīng)答優(yōu)于口服途徑，基因槍轟擊誘導(dǎo)體液免疫應(yīng)答的能力較肌注和口服途徑強(qiáng)，三種免疫途徑中僅口服途徑產(chǎn)生黏膜反應(yīng)?；驑屴Z擊細(xì)胞和體液免疫應(yīng)答具有一定的劑量相關(guān)性，而肌肉注射僅在細(xì)胞免疫方面。遞送載體可顯著提高機(jī)體的細(xì)胞免疫和粘膜免疫水平，其中陽(yáng)性脂質(zhì)體偏重細(xì)胞免疫，殼聚糖偏重粘膜免疫，具有良好的佐劑效