乙肝病毒X蛋白(HBx)促進(jìn)肝細(xì)胞增殖信號傳導(dǎo)途徑的研究.pdf

1、乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）感染與肝癌的發(fā)生具有十分密切的關(guān)系，HBVx基因開放閱讀框編碼的HBVX蛋白（HBx）在肝癌的發(fā)生發(fā)展和細(xì)胞增殖中具有十分重要的作用。然而，迄今為止HBx的致癌作用機(jī)理仍不十分清楚。為了進(jìn)一步闡明HBx致癌作用的分子機(jī)制，我們對乙肝病毒X蛋白（HBx）促進(jìn)肝細(xì)胞增殖的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑進(jìn)行了研究。
　　 我們前期基因芯片檢測結(jié)果顯示，與H7402細(xì)胞相比，穩(wěn)定轉(zhuǎn)染HBx基因的肝

2、癌細(xì)胞H7402-X中與花生四烯酸代謝相關(guān)的基因表達(dá)明顯上調(diào)。因此，我們進(jìn)一步通過Western blot檢測了花生四烯酸代謝酶cPLA2、COX-2和磷酸化p-ERK1/2在H7402-X細(xì)胞中的蛋白表達(dá)水平，并應(yīng)用熒光素酶報告基因、流式細(xì)胞儀、BrdU摻入實(shí)驗(yàn)檢測了H7402-X細(xì)胞的增殖能力。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，p-ERK1/2、cPLA2和COX-2蛋白在H7402-X細(xì)胞中均有高表達(dá)。應(yīng)用PTX（Gi/o蛋白抑制劑），Indo（AA

3、代謝酶COX-2抑制劑）和NDGA（LOX抑制劑）作用H7402-X細(xì)胞，可明顯下調(diào)p-ERK1/2的水平。此外，H7402-X細(xì)胞的條件培養(yǎng)液以濃度依賴方式上調(diào)H7402細(xì)胞中p-ERK1/2的水平，并且可促進(jìn)H7402細(xì)胞的增殖能力，該作用也能被上述抑制劑抑制。我們還應(yīng)用熒光素酶報告基因、流式細(xì)胞儀、BrdU摻入實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證了此結(jié)果。為了進(jìn)一步證實(shí)上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果，我們應(yīng)用了另一個細(xì)胞系L-O2-X（穩(wěn)定轉(zhuǎn)染pCMV-X質(zhì)粒的人永生化肝細(xì)胞

4、系），并與L-O2細(xì)胞進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)p-ERK1/2在L-O2-X細(xì)胞中的水平也很高，并且應(yīng)用Gi/o蛋白的抑制劑（PTX）可下調(diào)p-ERK1/2的水平。L-O2-X細(xì)胞的條件培養(yǎng)液也可上調(diào)L-O2細(xì)胞中p-ERK1/2的水平，并受到Indo的抑制。上述結(jié)果提示，L-O2-X細(xì)胞增殖的信號途徑與H7402-X細(xì)胞相似。
　　 本研究發(fā)現(xiàn)乙肝病毒X蛋白（HBx）通過花生四烯酸代謝途徑促進(jìn)肝細(xì)胞增殖的信號傳導(dǎo)途徑與cPLA2/花生四