瘦素對體外脂變HL-02細(xì)胞內(nèi)甘油三酯含量的影響.pdf

1、目的：觀察瘦素對體外脂質(zhì)變性人肝L-02細(xì)胞甘油三酯含量以及OB-Rb（瘦素受體）、STAT3(信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活子蛋白3)、MTP(微粒體甘油三酯轉(zhuǎn)移蛋白) mRNA表達(dá)的影響，以推斷瘦素、瘦素受體及其后信號通路，與非酒精性脂肪肝之間的可能關(guān)系，以探討瘦素調(diào)節(jié)脂變肝細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)代謝的作用機(jī)制，為今后進(jìn)一步研究提供理論依據(jù)。 方法：采用隨機(jī)對照研究，以離體人肝L-02細(xì)胞為研究對象。用10％（V/V）醫(yī)用脂肪乳注射液和10％（V/

2、V）胎牛血清的RPMI-1640完全培養(yǎng)基孵育人肝L-02細(xì)胞24小時，制備肝細(xì)胞脂肪變性模型。后分別加入重組人瘦素（10-6mol/L、10-7mol/L、10-8mol/L）孵育24小時，油紅O染色觀察細(xì)胞形態(tài)和細(xì)胞內(nèi)脂滴的形成情況，高效液相色譜法檢測細(xì)胞內(nèi)甘油三酯的含量，半定量RT-PCR法檢測MTP、OB-Rb和STAT3的mRNA表達(dá)。從而確定瘦素改善細(xì)胞脂肪變性的最佳濃度，作出量效關(guān)系。然后以瘦素最佳濃度分別孵育模型組細(xì)胞0

3、h、6h、12h、24h、48h，使用上述觀察方法，從而確定瘦素改善細(xì)胞脂肪變性的最佳時間，作出時效關(guān)系。實(shí)驗數(shù)據(jù)以±s表示，用SPSS13.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，以P<0.05作為差異顯著性標(biāo)準(zhǔn)。 結(jié)果：用脂肪乳注射液孵育人肝L-02細(xì)胞24小時后，經(jīng)油紅O染色后倒置顯微鏡觀察，人肝L-02細(xì)胞漿內(nèi)見大量紅色的小泡性脂滴；高效液相色譜法檢測示細(xì)胞內(nèi)甘油三酯含量明顯增高，成功的制備肝細(xì)胞脂肪變性模型。加入瘦素（10-8mol

4、/L、10-7mol/L、10-6mol/L）孵育24小時后，油紅O染色示胞漿內(nèi)脂滴與模型組比較明顯減低；高效液相色譜法結(jié)果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)甘油三酯含量隨瘦素劑量的增高而降低；半定量RT-PCR法檢測各組細(xì)胞的OB-Rb及其目標(biāo)基因STAT3、MTP的mRNA水平，結(jié)果顯示：瘦素處理組較模型組相比，OB-Rb及其目標(biāo)基因的mRNA表達(dá)明顯上升，有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。以瘦素（10-7mol/L）濃度為處理濃度，分別孵育模型組細(xì)胞0h、6

5、h、12h、24h、48h后，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：瘦素呈時間依賴性的降低脂變細(xì)胞內(nèi)甘油三酯含量，同時呈時間依賴性的增加OB-Rb及其目標(biāo)基因的mRNA的表達(dá)。 結(jié)論： 1.瘦素能降低體外人L-02脂變肝細(xì)胞內(nèi)甘油三酯的含量，呈時間、劑量依賴關(guān)系。 2.瘦素能促進(jìn)OB-Rb及其目標(biāo)基因STAT3、MTP 基因的表達(dá)增強(qiáng)，呈劑量依賴關(guān)系。 3.瘦素降低細(xì)胞內(nèi)甘油三酯作用可能與OB-Rb及其目標(biāo)基因表達(dá)上調(diào)有關(guān)。