COX-2對(duì)脂變BRL-3A肝細(xì)胞甘油三酯代謝的影響及Acsl1、Acsl6表達(dá)的調(diào)節(jié).pdf

1、目的：研究COX-2對(duì)脂變肝細(xì)胞BRL-3A株甘油三酯代謝及Acsl1、Acsl6表達(dá)的影響。
　　方法：
　　(1)篩選最佳誘導(dǎo)濃度，誘導(dǎo)細(xì)胞脂肪變性：體外培養(yǎng)大鼠肝細(xì)胞BRL-3A株，不同濃度醫(yī)用脂肪乳誘導(dǎo)大鼠肝細(xì)胞成脂肪變肝細(xì)胞，油紅O染色及蘇木素復(fù)染方法觀察各組細(xì)胞脂肪變狀態(tài)，MTT檢測(cè)細(xì)胞增殖活性及 ELISA檢測(cè)誘導(dǎo)前后細(xì)胞內(nèi)TG含量確定最佳誘導(dǎo)濃度。
　　(2)實(shí)驗(yàn)分為正常BRL-3A組、脂變BRL-3A

2、組，pYr-1.1-hU6-EGFP-COX-2shRNA組，pYr-1.1-hU6-EGFP-HK組，pcDNA3.1（+）-r-COX-2組，pcDNA3.1（+）-r-HK組，尼美舒利（200ug/ml）陽(yáng)性對(duì)照組，除正常BRL-3A組外，其余各組均以最佳誘導(dǎo)濃度6％脂肪乳培養(yǎng)24h后，瞬時(shí)轉(zhuǎn)染各組對(duì)應(yīng)的質(zhì)粒，ELISA檢測(cè)轉(zhuǎn)染后各組細(xì)胞內(nèi)TG含量，RT-PCR檢測(cè)各組COX-2mRNA、Acsl1mRNA、Acsl6mRNA的表

3、達(dá)。
　　結(jié)果：（1）醫(yī)用脂肪乳培養(yǎng)細(xì)胞24h誘導(dǎo)細(xì)胞脂變，油紅染色示肝細(xì)胞內(nèi)空泡脂滴增加，提示細(xì)胞脂肪變。ELISA結(jié)果表明細(xì)胞內(nèi)TG含量增加。結(jié)合油紅染色、MTT檢測(cè)的OD值及ELISA結(jié)果確定本實(shí)驗(yàn)最佳誘導(dǎo)濃度為6%醫(yī)用脂肪乳。
　?。?）pYr-1.1-hU6-EGFP-COX-2shRNA轉(zhuǎn)染至脂變BRL-3A細(xì)胞培養(yǎng)24h后熒光顯微鏡下觀察，細(xì)胞質(zhì)中可見(jiàn)綠色熒光，轉(zhuǎn)染效率達(dá)70%以上。
　　（3）ELISA

4、檢測(cè)轉(zhuǎn)染后各組細(xì)胞內(nèi)TG含量，pYr-1.1-hU6-EGFP-COX-2shRNA組與尼美舒利組TG含量均減少(p<0.05)，以pYr-1.1-hU6-EGFP-COX-2shRNA組減少明顯，均低于其余6組(p<0.01)，而pcDNA3.1（+）-r-COX-2組高于其余6組(p<0.05)。尼美舒利組低于pcDNA3.1（+）-r-COX-2組但高于pYr-1.1-hU6-EGFP-COX-2shRNA組，pYr-1.1-hU

5、6-EGFP-HK組和pcDNA3.1（+）-r-HK組無(wú)明顯變化，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p>0.05）。
　?。?）7個(gè)組別 COX-2、Acsl1、Acsl6基因表達(dá)情況：COX-2mRNA表達(dá)情況：與正常肝細(xì)胞組相比，脂變肝細(xì)胞組中COX-2mRNA表達(dá)增高(p<0.05)。與脂變肝細(xì)胞組相比， pYr-1.1-hU6-EGFP-COX-2shRNA組及尼美舒利組中COX-2mRNA表達(dá)降低(p<0.05)，以pYr-1.1-hU6

6、-EGFP-COX-2shRNA組降低明顯(p<0.01)，而pcDNA3.1（+）-r-COX-2組中COX-2mRNA表達(dá)增高(p<0.05)。pYr-1.1-hU6-EGFP-HK組和pcDNA3.1（+）-r-HK組COX-2mRNA無(wú)明顯增高，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p>0.05）。脂代謝基因 Acsl1mRNA、Acsl6mRNA表達(dá)情況：與正常肝細(xì)胞組相比，脂變肝細(xì)胞中Acsl1mRNA、Acsl6mRNA表達(dá)增高(p<0.05)。

7、與脂變肝細(xì)胞組相比， pYr-1.1-hU6-EGFP-COX-2shRNA及尼美舒利組中Acsl1mRNA、Acsl6mRNA表達(dá)均降低(p<0.05)。以pYr-1.1-hU6-EGFP-COX-2sh RNA組下調(diào)明顯(p<0.01)，pcDNA3.1（+）-r-COX-2組中Acsl1、Acsl6表達(dá)則明顯增高(p<0.05)。而 pYr-1.1-hU6-EGFP-HK組和pcDNA3.1（+）-r-HK組中Acsl1mRNA、