雌激素對(duì)脂肪細(xì)胞瘦素脂聯(lián)素mRNA表達(dá)的影響.pdf

1、目的： 測(cè)定不同濃度雌激素對(duì)體外培養(yǎng)人大網(wǎng)膜脂肪細(xì)胞瘦素、脂聯(lián)素mRNA表達(dá)的影響。 方法： 1.選擇擇期開腹手術(shù)病人,無菌條件下新鮮切取腹部大網(wǎng)膜脂肪組織,經(jīng)膠原酶消化分離人前脂肪細(xì)胞。用DMEM/F12(1:1)培養(yǎng)基在37℃、5％CO2條件下培養(yǎng),并誘導(dǎo)分化為成熟脂肪細(xì)胞。 2.對(duì)脂肪細(xì)胞進(jìn)行干預(yù)：用不同濃度的雌二醇(1nmol/L、10nmol/L、100nmol/L)干預(yù)24h;選取高濃度組,即

2、雌二醇100nmol/L干預(yù)12h、24h、48h。用細(xì)胞形態(tài)學(xué)和油紅O染色法鑒定細(xì)胞,用半定量反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)法檢測(cè)脂肪細(xì)胞瘦素、脂聯(lián)素mRNA表達(dá)水平。 3.數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(-x±S)表示,采用完全隨機(jī)設(shè)計(jì)的單因素方差分析(One-way ANOVA)進(jìn)行處理,P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果： 1.成功地培養(yǎng)出人大網(wǎng)膜前脂肪細(xì)胞。 培養(yǎng)出的梭形細(xì)胞成分均一、增殖旺盛、分化

3、率高,經(jīng)細(xì)胞形態(tài)學(xué)的動(dòng)態(tài)觀察及油紅O脂肪染色抽取法的鑒定,證明是功能活躍的前脂肪細(xì)胞。 2.半定量RT-PCR法擴(kuò)增瘦素、脂聯(lián)素(348bp、124bp),結(jié)果表明： ①雌二醇在1nmol/L-100nmol/L范圍內(nèi)以劑量依賴性方式促進(jìn)瘦素表達(dá),最高達(dá)對(duì)照組的1.68倍。 ②雌二醇在1nmol/L-100nmol/L范圍內(nèi)以劑量依賴性方式抑制脂聯(lián)素表達(dá),抑制率最高達(dá)對(duì)照組的51.8％。 ③雌二醇100n

4、mol/L在12h-48h范圍內(nèi)以時(shí)間依賴性方式促進(jìn)瘦素表達(dá)。 ④雌二醇100nmol/L在12h-48h范圍內(nèi)以時(shí)間依賴性方式抑制脂聯(lián)素表達(dá)。 3.瘦素與脂聯(lián)素的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。 結(jié)論： 1.使用膠原酶消化的方法分離并原代培養(yǎng)了人大網(wǎng)膜前脂肪細(xì)胞,驗(yàn)證了本實(shí)驗(yàn)室建立的細(xì)胞培養(yǎng)模型的可行性及實(shí)用性,為研究各種激素對(duì)脂肪細(xì)胞因子的作用提供了基礎(chǔ)。 2.離體狀態(tài)下雌激素促進(jìn)瘦素表達(dá)、抑制脂聯(lián)素表達(dá),為更