慢性酒精中毒性肌病一氧化氮合酶與抗氧化狀態(tài)關系的研究.pdf

1、本文旨在利用大鼠慢性酒精中毒性肌病模型檢測骨骼肌中NOS的表達情況，以及氧化-抗氧化狀態(tài)的變化。比較分析慢性酒精中毒性肌病中的氧化-抗氧化狀態(tài)和一氧化氮合酶的改變特征，進一步地探討該病發(fā)病機制，為CAM的防治提供理論依據。 方法：(1)建立慢性酒精中毒性大鼠肌病模型，觀察大鼠體重、肌肉濕重、脛骨長度及濕重、和肌肉組織病理改變。(2)實驗組用含飼料總能量36﹪的酒精給大鼠灌胃，對照組用含與酒精熱量相等的蔗糖灌胃，兩組均喂飼改良的全

2、營養(yǎng)高脂飼料，于10周后，取后肢肌肉，在分離出腓腸肌、比目魚肌、跖肌后，將各類肌肉均分別地制備成冰凍切片和肌組織勻漿，經組織化學染色確認成模后采用免疫組化方法檢測nNOS和iNOS的表達；采用免疫熒光法檢測nNOS的表達；采用分光光度計法檢測抗氧化指標—超氧化物歧化酶(Superoxidedismutase，SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(Glutathioneperoxidase，GSH-px)和丙二醛(Maleicdialdehyde

3、，MDA)以及iNOS活性的變化。 結果：(1)酒精染毒后，Ⅱ型肌纖維較Ⅰ型肌纖維病理損害更嚴重，酒精染毒大鼠出現(xiàn)了肌纖維變性、壞死，肌纖維萎縮呈角形、條形或不規(guī)則形改變，炎細胞浸潤和肌纖維再生、肌間結締組織增生等典型的病理改變。(2)分光光度計法顯示：實驗組同對照組大鼠比較，以Ⅱ型肌纖維為主的肌肉(跖肌)中SOD含量升高19.62﹪(49.63±3.61與41.49±8.21，P＜0.05)；GSH-px含量降低15.86﹪(

4、74.82±9.85與88.92±15.40，P＜0.05)；MDA含量升高77.32﹪(58.73±35.44與33.12±20.20，P＜0.05)；iNOS含量升高94.16﹪(0.899±0.484與0.463±0.142，。P＜0.05)，而以Ⅰ型肌纖維為主的肌肉(比目魚肌)中除MDA值較對照有顯著升高外，SOD、GSH-px、iNOS含量均無顯著性差異(P＞0.05)。(3)免疫組化結果顯示：iNOS在實驗組肌細胞胞漿中有較

5、強的陽性表達，nNOS在實驗組肌細胞肌膜上的表達量降低，有的還出現(xiàn)了向胞漿轉移的現(xiàn)象。(4)免疫熒光結果顯示：實驗組同對照組相比，nNOS在肌膜上的熒光染色出現(xiàn)明顯下調，甚至缺失。 結論：(1)本研究結果支持慢性酒精中毒性肌病大鼠體內存在自由基的釋放和清除機制的紊亂；(2)酒精能誘發(fā)機體的氧化應激反應，致機體氧化抗氧化失衡；(3)iNOS的胞漿表達增高和nNOS的肌膜表達下調與肌病的發(fā)生密切相關，提示酒精誘導的氧化應激損傷和一氧