葡萄糖對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞一氧化氮釋放及內(nèi)皮型一氧化氮合酶活性的影響.pdf

1、目的：探討在體外培養(yǎng)的條件下，葡萄糖對(duì)豬髖動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞(PIEC)釋放一氧化氮(nitric oxide NO)、超氧陰離子(superoxide anion O2-)及內(nèi)皮型一氧化氮合酶(endothelial NO synthase eNOS)活性的影響。 方法：自中國(guó)科學(xué)院上海生命科學(xué)院細(xì)胞資源中心購(gòu)買(mǎi)PIEC，置于含10％胎牛血清、青霉素l000/ml、鏈霉素100μg/ml的RPMI-1640培養(yǎng)液中，取貼壁生長(zhǎng)良好的

2、第6代PIEC，用0.25％胰酶消化，細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，以每孔4×105個(gè)細(xì)胞接種到24孔板上，24h后觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)良好。待細(xì)胞生長(zhǎng)至70％-80％融合時(shí)，將胎牛血清濃度改為2％使細(xì)胞處于基本靜止?fàn)顟B(tài)。隨機(jī)分組，分為對(duì)照組、普通組和高糖組，分別加入5.5mmol/L、11.1 mmol/L、22.2mmol/L葡萄糖，每組設(shè)五個(gè)復(fù)孔。置于37℃、5％CO2溫箱中培養(yǎng)，分別于24h、72h及1周時(shí)進(jìn)行檢測(cè)。在每個(gè)檢測(cè)時(shí)間點(diǎn)前24h傳代一

3、次，使細(xì)胞數(shù)目相等，盡量減少細(xì)胞數(shù)目對(duì)結(jié)果的影響。 NO檢測(cè)采用硝酸還原酶法，通過(guò)測(cè)定培養(yǎng)液中亞硝酸鹽的含量，間接測(cè)出NO水平，根據(jù)顯色深淺反映濃度的高低。為排除培養(yǎng)液本身可能含有的亞硝酸鹽干擾，設(shè)空白培養(yǎng)液對(duì)照。超氧化物可以還原水溶性四嘩鹽(WST-1)產(chǎn)生可溶性有色物質(zhì)；NOS催化產(chǎn)生NO，NO與親核物質(zhì)生成有色化合物，分別采用化學(xué)比色法在450nm和530nm波長(zhǎng)測(cè)定吸光值來(lái)反映O2-含量及eNOS活性。 結(jié)果：2

4、4h時(shí)普通組和高糖組使得NOS活性、NO及O2-的含量均較對(duì)照組升高，其中普通組NO含量為77.80±9.05μmol/L、O2-含量為1.55±0.37，P<0.05，eNOS活性為0.95±0.27U/L，P<0.05：高糖組eNOS活性1.38±12 U/L、NO含量91.07±11.36μmol/L，P<0.05，O2-的含量2.64±0.1 1，P<0.01。72h時(shí)普通組和高糖組eNOS活性、NO及O2-的含量均較對(duì)照組升高

5、，其中普通組eNOS活性1.07±0.13U/L、NO含量89.84±8.03μmol/L，P<0.05，O2-的含量4.86±0.42，P<0.01；高糖組eNOS活性1.55±0.10 U/L、NO含量105.54±6.41μmol/L，O2-的含量5.65±0.76，P<0.01。1周時(shí)普通組和高糖組eNOS活性、NO及O2-的含量均較對(duì)照組降低，其中普通組eNOS活性0.47±06 U/L、NO含量41.59±8.21μmol/