小麥硬度基因遺傳多樣性的SSR分子標記研究.pdf

1、小麥的籽粒硬度與面粉顆粒度大小、出粉率、破損淀粉粒數(shù)量有關(guān),決定著小麥的加工品質(zhì),是小麥重要品質(zhì)性狀之一,同時也是國內(nèi)外小麥市場分級和定價的重要依據(jù)。本研究在影響硬度性狀的主效基因Pina和Pinb座位周圍尋找微衛(wèi)星重復位點,設(shè)計引物,通過瓊脂糖電泳、聚丙烯酰胺電泳、毛細管電泳以及核苷酸測序的方法對青海育成品種、西藏地方小麥品種和節(jié)節(jié)麥進行了遺傳多樣性研究,獲得以下結(jié)果:
　　1.通過分析小麥硬度基因周圍的187kb核苷酸序列,發(fā)

2、現(xiàn)了20個微衛(wèi)星位點。篩選4個重復度高的位點并設(shè)計引物,經(jīng)過瓊脂糖電泳分析后,發(fā)現(xiàn)了擴展較好的微衛(wèi)星位點SSR7。測序后發(fā)現(xiàn)PCR擴增產(chǎn)物的核苷酸序列與目標片段一致,包含18次 AG重復的SSR區(qū)域。該位點位于Pina基因的啟動子區(qū)域,距起始密碼子495個堿基處,可以檢測硬度基因的等位變異。
　　2.SSR7位點在青海省育成小麥品種和西藏小麥品種中具有明顯的多態(tài)性,一共有18種類型。最短類型為154bp,最長類型為182bp。片段

3、長度在176bp以上全部為西藏品種,其中包含品種最多的類型為171bp,有22個品種。片段長度為154bp和166bp類型中品種數(shù)各有一個,品種名分別為y1904和香農(nóng)3。
　　3.從SSR7引物所擴增的青海育成品種和西藏地方小麥品種中,挑選出毛細管電泳中條帶差異較顯著的品種,又用保護SSR7微衛(wèi)星區(qū)域的引物Pina-promoter擴增上述挑選的差異品種和節(jié)節(jié)麥材料,將其測序后發(fā)現(xiàn):青海育成小麥和西藏地方小麥與節(jié)節(jié)麥的堿基排序中

4、重復序列均為AG,重復類型共有6種,重復次數(shù)分別為6,10,16,18,19,20,而節(jié)節(jié)麥中僅存在兩種重復類型,次數(shù)分別為6和10。從三個不同品種的重復序列的差異性可推測,普通小麥Pina和Pinb基因很可能不是來源于本實驗研究的節(jié)節(jié)麥材料。
　　4.青海育成品種和西藏地方小麥品種堿基序列的SSR5’端,比節(jié)節(jié)麥多1-2個 AC重復。除節(jié)節(jié)麥品種AS61和AS81之外,其余的22個節(jié)節(jié)麥中起始密碼子上游660bp存在一個13個堿

5、基的缺失。節(jié)節(jié)麥與普通小麥在SSR7位點以及Pina基因啟動子區(qū)域存在的核苷酸序列差異,可以為鑒定普通小麥和節(jié)節(jié)麥中硬度基因的來源提供依據(jù)。
　　5.相同引物SSR7的毛細管電泳片段長度對應著不同的籽粒硬度值以及硬度基因的等位變異類型。這可能是由于SSR位點發(fā)生改變的頻率遠高于SNP位點發(fā)生的概率,也有可能是SSR位點以外的擴增區(qū)域發(fā)生的變異,還需要進一步的研究與驗證。
　　以上這些研究結(jié)果為小麥硬度基因的等位變異檢測以及分