調(diào)節(jié)性B細胞在系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者中的表達及作用.pdf

1、研究背景：系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）是一種多發(fā)于生育年齡女性、累及多臟器的自身免疫性炎癥性疾病，其特征為 B細胞異?；罨a(chǎn)生大量的自身抗體，形成免疫復(fù)合物在組織沉積，或抗體直接與組織細胞抗原作用，引起細胞破壞，造成廣泛組織損傷及機體多系統(tǒng)損害。SLE的病因及發(fā)病機制至今仍未完全闡明，B細胞異常被認為是 SLE發(fā)病的中心環(huán)節(jié)之一。一般認為B細胞主要通過產(chǎn)生特異性抗體或多種細胞因子等發(fā)揮上調(diào)免疫反應(yīng)的作用，也可作為專職抗原呈遞細胞參與免疫應(yīng)

2、答。但近年的研究發(fā)現(xiàn)，缺乏 B細胞和CDl9-/-的小鼠在實驗性自身免疫性腦脊髓膜炎(EAE)小鼠模型中疾病更加嚴重，并且在T細胞介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)實驗中，CDl9-/-小鼠表現(xiàn)了更為嚴重的接觸性超敏反應(yīng)(CHS)。由此推斷，B細胞在負性調(diào)節(jié)中亦起到了很大作用，與T細胞一樣，B細胞中也存在調(diào)節(jié)性的細胞亞群。2002年Mizoguchi等在慢性炎癥性腸病鼠模型中發(fā)現(xiàn)CD1d+的B細胞亞群可分泌IL-10,并抑制疾病進展，并首次開始使用調(diào)節(jié)性B

3、細胞(Bregs)這個術(shù)語。Bregs通過分泌IL-10和TGF-β1發(fā)揮負性調(diào)節(jié)作用。其中產(chǎn)生IL-10的Breg細胞被稱為B10細胞。其調(diào)節(jié)自身免疫性疾病的作用可概括為：自身抗原刺激B10前體細胞，在LPS等條件下發(fā)育為成熟B10細胞，后者主要通過分泌IL-10等細胞因子抑制巨噬細胞、APC及Th細胞活化，減少TNF-α、IL-1及IL-6等炎癥性細胞因子分泌，下調(diào)巨噬細胞吞噬作用，降低APC共刺激分子合成釋放，同時抑制Th1細胞活

4、化，從而發(fā)揮在自身免疫性疾病中的負向調(diào)節(jié)作用。IL-10一方面抑制單核巨噬細胞炎癥介質(zhì)的釋放及抑制單核巨噬細胞的抗原遞呈作用、增強抗炎性因子釋放，同時IL-10并抑制IL-12合成的作用，以此阻礙Th1免疫反應(yīng)。另一方面IL-10可誘導(dǎo)初始T細胞向Tregs轉(zhuǎn)化，其誘導(dǎo)產(chǎn)生的Tregs也可以作用于APCs和DC細胞等發(fā)揮免疫抑制功能。
　　近年來多個SLE動物模型提示均有Bregs細胞數(shù)量減少或功能缺陷導(dǎo)致IL-10和TGF-β1

5、分泌的減少，移植具有分泌IL-10功能的Breg細胞可使病情緩解。因此，分泌IL-10的調(diào)節(jié)性B細胞（B10細胞）的作用尤為重要，細胞內(nèi)IL-10染色是B10細胞鑒定方式之一，同時有研究發(fā)現(xiàn)CD19+CD24hiCD38hi是分泌IL-10的調(diào)節(jié)性 B細胞的主要細胞表型。研究 Bregs細胞及其效應(yīng)的細胞因子在 SLE患者中的表達情況，對了解其在 SLE發(fā)病過程中參與的角色及發(fā)揮的作用有重要意義。本研究采用流式細胞術(shù)檢測 SLE患者和健

6、康對照者外周血中CD19+IL-10+細胞及CD19+CD24hiCD38hi細胞的比例，同時應(yīng)用ELISA技術(shù)檢測細胞培養(yǎng)上清中IL-10水平，分析其與疾病活動的關(guān)系，探討B(tài)regs細胞及其效應(yīng)細胞因子在SLE發(fā)病機制中的作用。
　　研究目的：檢測系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者外周血中調(diào)節(jié)性Bregs的表達，探討B(tài)regs細胞在SLE發(fā)病機制的作用。
　　研究方法：選擇60例SLE患者（其中活動期38例，穩(wěn)定期22例）和20例健康對照

7、者為研究對象，分離外周血單個核細胞(PBMC)，以CD40L及 CPG寡核苷酸刺激 PBMC并進行培養(yǎng)，用流式細胞術(shù)分析外周血CD19+IL-10+Breg細胞和CD19+CD24hiCD38hi Breg細胞的表達；ELISA方法檢測培養(yǎng)上清中白細胞介素（IL）-10的水平。
　　研究結(jié)果：
　　一、CD19+IL-10+細胞檢測結(jié)果
　　1、外周血CD19+IL-10+細胞的表達：SLE患者外周血CD19+IL-1

8、0+細胞的表達（1.86±0.80）％較正常對照組（4.36±1.00）%減少，其中活動期SLE患者外周血中CD19+IL-10+細胞的表達率為（1.54±0.64）%，均低于穩(wěn)定期SLE患者（2.42±0.75）%和正常對照組（4.36±1.00）%；而穩(wěn)定期SLE患者組外周血中CD19+IL-10+細胞的表達率亦低于正常對照組。
　　2、外周血CD19+IL-10+細胞的表達與疾病活動程度的相關(guān)性：SLE患者外周血CD19+I

9、L-10+細胞的表達與SLEDAI評分呈負相關(guān)。同時，外周血CD19+IL-10+細胞的表達與補體C3及C4呈正相關(guān)。
　　二、CD19+CD24hiCD38hi細胞檢測結(jié)果
　　1、外周血CD19+CD24hiCD38hi細胞的表達：SLE患者外周血CD19+CD24hiCD38hi細胞的表達（1.53±0.63）%較正常對照組（3.14±0.87）%減少，其中活動期SLE患者外周血中CD19+CD24hiCD38hi細胞

10、的表達率為（1.26±0.45）%，均低于穩(wěn)定期SLE患者（2.01±0.61）%和正常對照組（3.14±0.87）%；而穩(wěn)定期SLE患者組外周血中CD19+CD24hiCD38hi細胞的表達率亦低于正常對照組。
　　2、外周血CD19+CD24hiCD38hi細胞表達率與CD19+IL-10+細胞表達率的相關(guān)性：SLE患者外周血CD19+CD24hiCD38hi細胞的表達與CD19+IL-10+細胞呈正相關(guān)。
　　3、外周

11、血CD19+CD24hiCD38hi細胞的表達與疾病活動程度的相關(guān)性：SLE患者外周血CD19+CD24hiCD38hi細胞的表達與SLEDAI評分呈負相關(guān)。同時，外周血CD19+CD24hiCD38hi細胞的表達與補體C3及C4呈正相關(guān)。
　　三、IL-10水平檢測結(jié)果
　　1、細胞培養(yǎng)上清液IL-10水平的測定：SLE患者細胞培養(yǎng)上清液IL-10水平（5.40±2.78）pg/ml較正常對照組（10.64±3.57）pg

12、/ml減少，其中活動期SLE患者細胞培養(yǎng)上清液IL-10水平為（4.68±2.30）pg/ml，均低于穩(wěn)定期SLE患者（6.64±3.141）pg/ml和正常對照組（10.64±3.57）pg/ml；而穩(wěn)定期SLE患者組細胞培養(yǎng)上清液IL-10水平亦低于正常對照組。
　　2、細胞培養(yǎng)上清液IL-10水平與Breg細胞表達率的相關(guān)性：SLE患者細胞培養(yǎng)上清液IL-10水平與CD19+IL-10+細胞的表達率呈正相關(guān)，與CD19+CD