Gαq在系統(tǒng)性紅斑狼瘡T細(xì)胞中的表達(dá)及機(jī)制研究.pdf

1、目的:
　　系統(tǒng)性紅斑狼瘡(Systemic lupus erythematosus，SLE)是一種復(fù)雜的自身免疫性疾病，主要由自身抗體抗原形成的免疫復(fù)合物沉積導(dǎo)致多系統(tǒng)多器官組織的損傷,T細(xì)胞功能缺陷是SLE整個(gè)免疫系統(tǒng)紊亂的核心。Gαq為G蛋白的亞家族成員之一的Gq蛋白的α亞基，研究表明Gαq對(duì)T、B細(xì)胞免疫反應(yīng)具有重要調(diào)節(jié)作用。本課題通過(guò)檢測(cè)Gαq在系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者外周血單個(gè)核細(xì)胞及T淋巴細(xì)胞中的表達(dá)水平，并分析Gαq與S

2、LE病情活動(dòng)指數(shù)（Systemic Lupus Erythematosus Disease Activity Index,SLEDAI）、臨床表現(xiàn)、實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)、Th1、Th2、Th17、Treg細(xì)胞的細(xì)胞因子和Bax、Bcl-2等凋亡相關(guān)基因的相關(guān)性，進(jìn)一步探討Gαq在SLE發(fā)病機(jī)制中的作用。
　　方法:
　　選取我院風(fēng)濕免疫科就診的系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者40例（5男35女，平均年齡32.6±9.4歲），所有患者均符合1997年

3、美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)會(huì)系統(tǒng)性紅斑狼瘡診斷標(biāo)準(zhǔn)，并排除合并有癌癥、嚴(yán)重感染、肝炎、結(jié)核和過(guò)敏者。選取37例（3男34女，平均年齡33.5±9.5歲）正常健康體檢者作為對(duì)照，兩組入選者的性別、年齡和種族無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。部分患者及健康者自愿多獻(xiàn)出血量用于CD3+T細(xì)胞的磁珠分選，由34例(3男31女，平均年齡29.5±6.6歲)患者及30例（7男23女，平均年齡28.3±6.3歲）正常對(duì)照者組成CD3+T細(xì)胞組。采用Real-time PCR方法檢測(cè)各

4、組的Gαq mRNA表達(dá)水平。
　　分析患者Gαq mRNA表達(dá)水平與常見(jiàn)臨床特征，如脫發(fā)、口腔潰瘍、皮疹、漿膜炎、貧血、白細(xì)胞減少、血小板減少、腎臟受累、關(guān)節(jié)炎，實(shí)驗(yàn)室檢查如ANA、抗ds-DNA、抗AnuA、抗smith、抗rRNP、抗AHA抗體、補(bǔ)體C3、補(bǔ)體C4、IgG、肌酐和尿蛋白的相關(guān)性。
　　Real-time PCR檢測(cè)SLE T細(xì)胞中IL-4、IFN-r、IL-17、Foxp3mRNA表達(dá)水平與正常對(duì)照的差

5、異，并分別進(jìn)行與Gαq mRNA的相關(guān)性分析。
　　Real-time PCR檢測(cè)患者T淋巴細(xì)胞中Bax、Bcl-2 mRNA的表達(dá)水平進(jìn)一步分析其與Gαq mRNA的相關(guān)性。
　　結(jié)果:
　?、賁LE患者PBMC和CD3+T淋巴細(xì)胞中GαqmRNA表達(dá)水平明顯低于HC，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.0001;p=0.025)，提示Gαq可能參與SLE的發(fā)病。但只有SLE患者CD3+T細(xì)胞中GαqmRNA的表達(dá)水平與SLE

6、DAI具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(r=-0.561，p=0.001);而SLE患者PBMCs中的GαqmRNA的表達(dá)水平與SLEDAI無(wú)相關(guān)性(r=-0.059，p=0.716)，提示T細(xì)胞中Gαq與SLE病情活動(dòng)相關(guān)。
　?、贑D3+T細(xì)胞的GαqmRNA水平在有腎臟受累的患者中明顯低于腎臟無(wú)損傷的患者和正常對(duì)照(p=0.0023，p=0.0006)，GαqmRNA水平在有脫發(fā)、口腔潰瘍、皮疹、漿膜炎、貧血、白細(xì)胞減少、血小板減少、關(guān)節(jié)炎者

7、和沒(méi)有上述相關(guān)臨床表現(xiàn)的患者相比無(wú)差異。
　　進(jìn)一步結(jié)果揭示SLE患者CD3+T細(xì)胞中GαqmRNA水平與肌酐和尿蛋白負(fù)相關(guān)(r=-0.507，p=0.002;r=-0.429，p=0.011)與補(bǔ)體C3正相關(guān)(r=0.390，p=0.022)與補(bǔ)體C4、ANA、抗ds-DNA、抗smith、抗rRNP、抗AnuA、抗AHA抗體、IgG等無(wú)相關(guān)。
　　③IFN-r、IL-17、Foxp3mRNA等在SLE T細(xì)胞中的表達(dá)都高

8、于HC(p=0.033;p=0.012; p=0.001)，但是IL-4mRNA的表達(dá)水平與對(duì)照相比無(wú)統(tǒng)計(jì)意義(p=0.256)。
　　SLE患者PBMC中的IL-4、IFN-r、IL-17、Foxp3mRNA水平與GαqmRNA表達(dá)水平都無(wú)相關(guān)性:(r=-0.017，p=0.914; r=0.247，p=0.123; r=-0.052，p=0.748; r=0.148，p=0.356);但是在患者CD3+T細(xì)胞中GαqmRNA的

9、表達(dá)水平分別與IL-4、IFN-r、IL-17mRNA水平呈負(fù)相關(guān)(r=-0.457，p=0.006; r=-0.456，p=0.005; r=-0.614，p＜0.0001)但是GαqmRNA表達(dá)水平與Foxp3mRNA水平無(wú)相關(guān)（r=-0.113，p=0.525）。
　?、躍LE患者CD3+T細(xì)胞中的GαqmRNA表達(dá)水平分別與促凋亡基因Bax正相關(guān)(r=0.542，p=0.001)與抗凋亡基因Bcl-2負(fù)相關(guān)(r=-0.36