CD200在系統(tǒng)性紅斑狼瘡中的表達(dá)及意義.pdf

1、系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)是一種復(fù)雜的自身免疫性疾病，其特征為免疫復(fù)合物沉積在多種組織器官引起的免疫病理損傷。一般認(rèn)為，SLE是多因性的疾病，先天遺傳的易感因素和外界環(huán)境的作用對(duì)機(jī)體的免疫功能產(chǎn)生影響，導(dǎo)致免疫調(diào)控機(jī)制的缺陷。
　　 近二十年來，以基因芯片為代表的高通量新技術(shù)的出現(xiàn)為SLE生物標(biāo)記物的尋找開辟了有效的道路。在本實(shí)驗(yàn)室的前期工作中，已經(jīng)使用基因芯片完成了對(duì)7例SLE家系和4例正常對(duì)照外周血單個(gè)核細(xì)胞(peripher

2、al blood mononuclear cells，PBMC)中mRNA的表達(dá)水平的篩選，發(fā)現(xiàn)在SLE患者與正常對(duì)照中存在著表達(dá)量有顯著差異的多個(gè)基因，其中有一些基因與機(jī)體的免疫功能有一定的關(guān)系比如CD200，ID3和DUSP-2等等。
　　 本研究的目的是在SLE患者與正常對(duì)照中對(duì)PBMC中CD200，ID3，DUSP2的mRNA的表達(dá)水平的差異進(jìn)行驗(yàn)證，并分析其編碼的蛋白表達(dá)水平的差異，同時(shí)研究其與疾病活動(dòng)性以及不同靶器官

3、損害的相關(guān)性，以尋找可能的生物標(biāo)記物與治療靶點(diǎn)。
　　 首先我們用RT-PCR的方法對(duì)7例SLE患者與6例正常對(duì)照PBMC中mRNA的表達(dá)水平進(jìn)行初步驗(yàn)證，發(fā)現(xiàn)在SLE患者PBMC中CD200與內(nèi)參基因光密度的比值較正常對(duì)照顯著下降(p<0.05)，而ID3和DUSP2與正常對(duì)照之間無顯著差異。
　　 然后，我們采用了Real-time PCR在mRNA水平對(duì)CD200及受體CD200R進(jìn)行進(jìn)一步研究。我們選擇了46例S

4、LE患者，其中有神經(jīng)精神癥狀的患者為Il例，有腎臟受累的患者為19例，初發(fā)未經(jīng)治療的患者11例；同時(shí)選擇了27例年齡與性別相匹配的健康志愿者作為正常對(duì)照。用△Ct(目的基因的Ct值一內(nèi)參基因的Ct值)對(duì)SLE患者與正常對(duì)照，SLE患者的不同亞組進(jìn)行比較。發(fā)現(xiàn)SLE患者中CD200，CD200R的△Ct值較正常對(duì)照顯著升高(p<0.05)，同時(shí)，有神經(jīng)精神癥狀的SLE患者CD200，CD200R的△Ct值較無神經(jīng)精神癥狀的SLE患者顯著升

5、高(p<0.05)，而在有腎臟受累以及無腎臟受累的患者之間無顯著差異，CD200與CD200R的△Ct值顯著相關(guān)。
　　 確定CD200在mRNA水平在SLE患者與正常對(duì)照存在顯著差異后，我們使用流式細(xì)胞術(shù)對(duì)CD200在細(xì)胞表面的表達(dá)水平進(jìn)行了檢測(cè)。共選擇了20例SLE患者與23例年齡與性別匹配的正常對(duì)照，使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)PBMC上以及T細(xì)胞、B細(xì)胞表面的CD200的表達(dá)情況，用陽性細(xì)胞的百分比對(duì)SLE患者與正常對(duì)照進(jìn)行比較。

6、結(jié)果發(fā)現(xiàn)，SLE患者PBMC中，CD200+細(xì)胞的百分比較正常對(duì)照顯著升高(p<0.05)，而在CD3+的細(xì)胞中，CD200+細(xì)胞的百分比較正常對(duì)照顯著下降(p<0.05)。在CD19+的細(xì)胞中，CD200+的百分比較正常對(duì)照無顯著差異。
　　 另外，對(duì)CD200的表達(dá)與臨床指標(biāo)的相關(guān)性進(jìn)行分析的結(jié)果顯示，CD200的相對(duì)表達(dá)量以及陽性細(xì)胞的百分比與SLEDAI評(píng)分，ESR之間沒有相關(guān)性，而CD200的△Ct值與CD3+CD20