氯霉素的高靈敏時(shí)間分辨熒光免疫分析方法的建立.pdf

1、氯霉素(chloramphenicol,CAP)在食品中的殘留導(dǎo)致了許多惡性疾病，并對(duì)人體產(chǎn)生嚴(yán)重危害。美國、加拿大、歐盟和中國等許多國家規(guī)定了CAP在所有食品動(dòng)物的可食用組織中不得檢出，所以建立一種高靈敏的檢測方法十分必要。 時(shí)間分辨熒光免疫分析方法(Time—resolvedfluoroimmunoassay，TRFIA)是近十年發(fā)展起來的一種新興的非放射性免疫標(biāo)記技術(shù)，具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)，并且非常適合大

2、規(guī)模樣品的篩選。 本論文旨在建立高靈敏的、快速檢測CAP時(shí)間分辨熒光免疫分析方法(CAP—TRFIA)。將CAP與牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶聯(lián)制備免疫抗原與包被抗原，以CAP—BSA免疫新西蘭大白兔制備CAP多克隆抗體，以CAP—OVA包被96孔板為固相抗原，與CAP標(biāo)準(zhǔn)品(游離抗原)競爭結(jié)合CAP抗體，用稀土離子Eu3+標(biāo)記的羊抗兔抗體進(jìn)行示蹤，建立起間接競爭CAP—TRFIA檢測方法。該方法的靈敏度為0.0

3、08ng/ml(8ppt)，測量范圍0.008ng/ml～100ng/ml，不同時(shí)間進(jìn)行的CAP—TRFIA的效應(yīng)點(diǎn)值ED20、ED50、ED80分另0為(25.75±0.442ng/ml、(0.917±0.081)ng/ml、(0.033±0.0016)ng/ml。批內(nèi)變異系數(shù)6.8％，批間變異系數(shù)13.5％。與琥珀酸氯霉素的交叉反應(yīng)率為19.28％，與甲砜霉素的交叉反應(yīng)率小于0.1％，與青霉素、諾氟沙星的交叉反應(yīng)率小于0.01％。牛

4、奶、蜂蜜、蝦和雞肉樣品的平均回收率分別為79.7％、112.6％、92.1％和97.1％。考核方法的熱穩(wěn)定性顯示有效期應(yīng)在六個(gè)月以上。相比較，酶聯(lián)免疫吸附檢測法(Enzyme—LinkedImmunoSorbentAssay，ELISA)試劑盒的靈敏度是0.05ng/ml，TRFIA有明顯提高。由于酶受溫度、pH等各因素的影響，EIASA試劑盒也存在穩(wěn)定性差，易產(chǎn)生假陽性等諸多問題。研究表明，CAP—TRFIA是目前報(bào)導(dǎo)的CAP檢測中最