宮頸癌組織中一氧化氮合酶及CD34的表達(dá).pdf

1、目的：宮頸癌是婦科惡性腫瘤之一,中國(guó)宮頸癌的總死亡率占婦科腫瘤的第二位,占總癌癥死亡率的第四位,因而引起廣大學(xué)者的重視.腫瘤血管形成是腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移的基礎(chǔ).有研究發(fā)現(xiàn),NO與血管形成密切相關(guān),NO可能是腫瘤生長(zhǎng)必要的血管形成開(kāi)關(guān),沒(méi)有NO,腫瘤的生長(zhǎng)將會(huì)因血供的缺乏而受到限制.NO由NOS催化生成,而誘導(dǎo)型-氧化氮合酶(iNOS)是起主要作用的酶.微血管密度是反映腫瘤血管形成的指標(biāo)之一,CD34作為血管內(nèi)皮細(xì)胞的標(biāo)記物,可觀察新生內(nèi)皮細(xì)

2、胞和微血管的變化.該試驗(yàn)通過(guò)檢測(cè)宮頸癌組織中iNOS及CD34的表達(dá),研究iNOS的表達(dá)與宮頸癌血管形成的關(guān)系.1.免疫組化方法iNOS染色和CD34染色均采用免疫組織化學(xué)SP法進(jìn)行.所有標(biāo)本均經(jīng)10％福爾馬林固定,石蠟包埋.切取腫瘤標(biāo)本4μm厚切片各4片,脫蠟至水,PBS緩沖液漂洗3分鐘;10％H2O2封閉內(nèi)源性過(guò)氧化物酶20分鐘,清洗3次;放入EDTA抗原修復(fù)液中,加熱至99℃,維持10分鐘,作抗原修復(fù);室溫下冷卻30分鐘,PBS液

3、漂洗3次,每次3分鐘;過(guò)氧化物酶阻斷劑孵育10分鐘,PBS漂洗3次,每次3分鐘,非免疫性動(dòng)物血清孵育40分鐘.PBS漂洗3次,每次3分鐘,滴加一抗(iNOS多克隆抗體或CD34單克隆抗體),室溫下孵育60分鐘,PBS漂洗3次,每次3分鐘,加生物素標(biāo)記二抗孵育10分鐘,PBS液漂洗3次,每次3分鐘,鏈霉素抗生物素-過(guò)氧化物酶溶液孵育10分鐘,PBS漂洗3次,每次3分鐘,DAB顯色,蘇木素淺染,脫水,封片,顯微鏡下觀察結(jié)果.2.數(shù)據(jù)及圖片處