TRPC6在SHR左室肥厚中的作用——TRPC6與BNP關(guān)系的研究.pdf

1、第一部分：目的:研究自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)肥厚心肌中TRPC6與腦鈉肽(Brain natriuretic peptide,BNP)及其受體(A-type natriuretic peptide receptor,NPR-A)表達(dá)的關(guān)系,探討高血壓心肌肥厚發(fā)生的可能機(jī)制。
　　方法:以18周齡的雄性SPF級(jí)SHR作為實(shí)驗(yàn)組(n=10),而相同周齡的雄性京都威斯特大鼠(WKY)為對(duì)照組(n=10)。①檢測(cè)大鼠收縮壓(SBP);②

2、測(cè)定左室質(zhì)量(LVM)并計(jì)算左室質(zhì)量指數(shù)(LVMI);③心肌膠原容積分?jǐn)?shù)(CVF)、心肌內(nèi)血管周圍膠原面積(PVCA)用天狼星紅染色評(píng)估;④左心室TRPC6、BNP及NPR-A蛋白表達(dá)用免疫組化及Westernblot檢測(cè)。
　　結(jié)果:①SHR組的SBP、LVM、LVMI、PVCA、CVF分別比WKY組明顯增高(P<0.05);②SHR組的TRPC6和BNP蛋白表達(dá)明顯高于WKY組(P<0.05),而NPR-A表達(dá)較WKY組明顯降

3、低(P<0.05)。
　　結(jié)論:SHR左室肥厚可能與TRPC6、BNP的上調(diào)和NPR-A下調(diào)有關(guān)。
　　第二部分：目的:研究TRPC6在培養(yǎng)的SHRCFs增殖中的作用及BNP對(duì)CFs增殖及TRPC6表達(dá)的影響變化,探討高血壓心肌成纖維細(xì)胞異常增殖的分子機(jī)制。
　　方法:取18周雄性SHR和WKY心肌成纖維細(xì)胞(CFs)進(jìn)行培養(yǎng),第三代細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn),以同步測(cè)定細(xì)胞WST-1代謝活性及Brd-UELISA評(píng)估細(xì)胞增殖,We

4、sternblot檢測(cè)TRPC6、BNP及其受體NPR-A蛋白的表達(dá)。以不同濃度的AngII(0、10-8、10-7、10-6mol/L)誘導(dǎo)CFs增殖及其TRPC6表達(dá),取作用最強(qiáng)的AngII濃度(10-6mol/L)用于實(shí)驗(yàn)。SHR來(lái)源的CFs為實(shí)驗(yàn)組并進(jìn)行如下分組:①空白對(duì)照組;②AngII組;③AngII+SKF96365組;④AngII+BTP2組;⑤AngII+BNP組;并設(shè)WKY來(lái)源的CFs為對(duì)照組:①空白對(duì)照組;②Ang

5、II組;③AngII+BNP組。
　　結(jié)果:①AngII呈劑量依賴性誘導(dǎo)培養(yǎng)的SHRCFs的增殖,并上調(diào)TRPC6蛋白的表達(dá);TRPC抑制劑SKF96365、BTP2明顯抑制AngII誘導(dǎo)的SHRCFs增殖(P<0.05),并下調(diào)TRPC6蛋白表達(dá)(P<0.05);②SHR來(lái)源的CFs在相同濃度(10-6mol/L)的AngII作用下,其增殖及TRPC6表達(dá),明顯高于WKY組(P<0.05);③BNP能抑制AngII誘導(dǎo)的WKY來(lái)

6、源的CFs增殖及TRPC6的上調(diào)(P<0.05),但相同濃度的BNP對(duì)SHR來(lái)源的CFs的增殖及TRPC6表達(dá)無(wú)明顯影響(P>0.05);④SHR空白對(duì)照組BNP表達(dá)與WKY空白對(duì)照組比較無(wú)明顯改變(P>0.05),而NPRA表達(dá)則顯著降低(P<0.05)。
　　結(jié)論:①TPRC6在SHR心肌成纖維細(xì)胞的增殖中起重要作用;②BNP能下調(diào)WKY心肌成纖維細(xì)胞TRPC6的表達(dá)并抑制其增殖,而對(duì)SHR無(wú)類似作用,其機(jī)制可能是SHR心肌成